TWS119 (GSK-3抑制剂)

化学名

3-[[6-(3-aminophenyl)-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl]oxy]phenol

简称

TWS119

别名

TWS 119, TWS-119

中文名

N/A

化学式

C₁₈H₁₄N₄O₂

分子量

318.33

CAS号

601514-19-6

纯度

98%

溶剂/溶解度

Water<1mg/ml; DMSO64mg/ml; Ethanol<1mg/ml

溶液配制

5mg加入1.57ml DMSO，或者每3.18mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SF2771-10mM用DMSO配制。

产品描述

TWS119是一种GSK-3β抑制剂，在无细胞试验中IC50为30nM；能够诱导神经细胞的分化，并且有助于干细胞生物学的研究。

信号通路

PI3K/Akt/mTOR; Stem Cells & Wnt

靶点

GSK-3β

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IC50

30nM

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体外研究

使用1μM TWS119处理P19细胞，使30-40%细胞进行分化，尤其分化为神经细胞谱，根据正确的神经元形态(通过标准EB形成法，且伴随着TWS119处理，产生60%神经分化)计数TuJ1阳性细胞。TWS119与GSK-3β(KD=126nM)紧密结合，通过表面等离子共振(SPR)量化，IC50为30nM。TWS119作用于小鼠胚胎癌和ES 细胞，有效诱导神经分化。TWS119处理肝星状细胞(HSC)，降低β-catenin磷酸化，诱导β-catenin核易位，提高谷氨酰胺合成酶产量，阻碍平滑肌肌动蛋白和Wnt5a合成，但促进胶质蛋白酸性蛋白，Wnt10b和成对的同源结构域转录因子2c的表达。TWS119触发β-catenin的迅速累积，增强与寡核苷酸(含Tcf和Lef结合的DNA序列)的核蛋白相互作用，且大幅上调Tcf7、Lef1和其他Wnt靶点基因包括Jun、Ezd7(编码Frizzled-7)、Nlk(编码Nemo样激酶)。TWS119 提高T细胞特定杀伤力和与保护IL-2的产生能力相关的IFN-g释放。最新研究显示TWS119处理多克隆活化人类T细胞，诱导Wnt信号。与表达CD45RO(+)CD62L(-)效应表型的对照激活T细胞相比，这些T细胞具有天然CD45RA(+)CD62L(+)表型，这种作用存在TWS119剂量依赖性。

体内研究

TWS119按30mg/kg计量处理细胞表面，细胞表达低水平CD44和高水平CD62L。

临床实验

N/A

特征

N/A

酶活性检测实验

方法

在BIAcore S51仪器上在25℃下在PBS buffer中测量SPR。GSK-3β-GST融合蛋白的相对光单位(11000-17000)通过EDC[1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺]耦合程序固定在S系列CM5生物传感器芯片上。GSK-3β稀释到温和酸性缓冲液(10mM KAc, pH 5.0)中，然后在浓度为20-200μg/ml时注射到传感芯片(事先使用EDC(0.2M)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS, 0.05M)的1:1混合物温育7分钟激活)中，注射7分钟。最后，通过注射7分钟乙醇胺(1M, pH 8.5)，而阻断生物传感器矩阵的未反应位点。随后,注射TWS119 90秒，浓度不断提高(0、2、4、8、16、32、62.5、125、250、500和1000nM), 随后300秒，GSK-3β-TWS119复合物解离。使用S51评价软件包对SPR进行测评。在四种不同表面进行两组独立滴定实验的数据值，取平均。假设 1:1结合模型，用于测定热力学和动力学结合系数。

细胞实验

细胞系

大鼠肝星状细胞(HSC)

浓度

N/A

处理时间

4小时和48小时

方法

使用酶连续灌注而分离雄性Wistar大鼠(体重为500-600g)肝星状细胞，通Nycodenz密度梯度离心而富集。由于其高脂肪含量，HSC富集在梯度离心的上层。HSC培养在含10% FCS，100U/ml青霉素和100g/ml链霉亲和素的DMEM培养基中。细胞按1000000个(HSC 7d)和2000000个(HSC 1d)的密度接种在每个培养皿(直径6cm)中。HSC培养1和7天，然后使用TWS119处理。使用DMSO制备10mM TWS119储存液。对照组用DMSO单独处理。在无血清条件下，加入TWS119 4小时和48小时。在实验培养基中只加入血清，测定HSC的DNA合成。然后进行western blot分析，免疫荧光染色和RT-PCR，用于测量生物学变化。

动物实验

动物模型

Pmel-1 TCR-转基因小鼠和pmel-1 ly5.1双转基因小鼠和pmel-1 Thy1.1双转基因小鼠

配制

TWS119溶于DMSO

剂量

30mg/kg

给药方式

腹腔注射

产品编号

产品名称

包装

SF2771-10mM

TWS119 (GSK-3抑制剂)

10mM×0.2ml

SF2771-5mg

TWS119 (GSK-3抑制剂)

5mg

SF2771-25mg

TWS119 (GSK-3抑制剂)

25mg

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说明书

1份