PBCV DNA连接酶

PBCV DNA 连接酶也称为SplintR 连接酶或 Chorella 病毒 DNA 连接酶，它能够高效催化相邻的 DNA 核苷酸的连接，这个连接过程需要一条互补的 RNA 在两条 DNA 单链间起“夹板”或“桥梁”的固定作用。PBCV DNA连接酶的这种活性远远优于传统的T4 DNA连接酶，有助于miRNAs和mRNAs，包括SNPs在内的研究方法的创新。另外，在二代测序和分子诊断等众多领域中，PBCV DNA连接酶是富集目的基因的理想选择。它具有稳定的生物活性，对 RNA 介导固定的 DNA 底物亲和性强（米氏常数 Km = 1 nM），能够在复杂的混合物中检测到亚纳摩尔级的特定 RNA。因此，在 RNA 检测技术中，PBCV DNA 连接酶不失为选择用酶。

组分

组分名称 数量
PBCV DNA Ligase(25 U/μl) 50μl
10×PBCV Ligation Buffer 250μl

应用

单链DNA的连接
基于探针法的miRNA的检测
SNP或剪接体的检测
RASL分析

活性定义

1 单位指 20 μl 反应体系中，1×PBCV 连接酶反应缓冲液，16℃ 条件下，15 分钟内能使 2 pmol 的DNA:RNA 杂交底物连接反应完成50%所需的酶量。

反应温度及失活

该酶的反应温度为25度，可在16-37度之间优化，37度可明显提高反应的特异性；该酶在65°C 加热20min即可失活。

储存

-20℃可保存3年。

使用注意事项

1. 1×PBCV Ligation Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，5mM MgCl2，10mM DTT。
2. 该酶对ATP的要求比较宽泛，10-100uM ATP范围内都可发挥活性，5mM Mg2+可显著增加连接产物的量，ph为7.5-8.0。
3. 该酶对一价阳离子非常敏感，如Nacl或KCl的浓度应低于50mM，100mM的Nacl会完全抑制连接反应。
4. 该酶的反应温度为16~37℃，随着温度的上升酶活性会提高，但此时腺苷化产物也随之增加，温度为25 ℃。
5. 连接效率随着夹板RNA长度的减少而降低，当长度小于等于10nt时，连接效率为零。
6. 供体的5’端个碱基为“A/T”时连接效率最高。
7. 受体的3’端个碱基为“T”时连接效率最高，3’端个碱基为“G”时连接效率最差。