T4 RNA 连接酶1

T4 RNA 连接酶1催化3’→5’磷酸二酯键的形成，使核苷酸的5’-磷酸末端和3’-羟基末端连接，伴随着ATP水解为AMP和PPi。T4 RNA 连接酶1的作用底物包括单链RNA、DNA及二核苷焦磷酸，它可催化ssDNA和RNA的连接，相对于ssDNA，该酶对RNA分子的连接和环化效率更高。 [T4 RNA连接酶I]

组分

组分名称 数量
T4 RNA Ligase1 (10 U/μl) 100μl
10×T4 RNA Ligase Buffer 250μl
10mM ATP 100μl
50% PEG 8000 500μl

应用

连接单链RNA和DNA
RNA 3’末端标记
RNA和DNA分子内和分子间连接
合成单链寡脱氧核苷酸
蛋白质中掺入非天然氨基酸

活性定义

1单位指在1×T4 RNA Ligase Buffer 中，37℃条件下，30分钟内将1nmol的5’-[32P]rA16转化为磷酸盐不溶物质所需要的酶量。

储存

-20℃可保存3年。

使用注意事项

1.1× T4 RNA Ligase Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，10mM MgCl2，1mM DTT。该酶反应时需要加入终浓度1mM ATP。
2. 反应温度37℃，65℃ 10min可使该酶失活。
3. 该酶的连接底物无论是ssDNA还是ssRNA均需要5’-磷酸化或预腺苷化。
4. 该酶不能连接双链DNA或RNA。
5. 加入终浓度5~10% PEG 8000或增加孵育时间可提高连接效率。