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NF-KB P65活性检测

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北京 更新日期：2024-12-08

北京嘉美臻元生物技术有限公司

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产品详情:

中文名称：
NF-KB P65活性检测
产品类别：
技术服务 免疫生化实验

NF-KB p65活性检测

 
一、核转录因子NF-kappaB介绍

1、核转录因子NF-kappaB（NF-kB）是一种重要的转录因子，参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。
 
2、NF-kappaB（NF-kB）最初被鉴定为在B细胞中和免疫球蛋白k轻链的增强子结合。但随后在非B-细胞的细胞质中被发现，形成NF-kB和IkB的复合物。最初在DNA结合蛋白复合物中分离的NF-kB是由p65(RelA)和p50构成的异源双聚体。其他分离的单体包括p49（也可称为p52），p75（c-Rel）,p68(RelB)。p65，p68，p75单体起反式激活作用。p50，p49（p52）单体具有DNA结合活力，但只具有微量的反式激活作用。据报道p49和NF-kB的单体p65形成具有转录活力的异源双体，类似于p50/ p65异源双体。p49/ p65和p50/ p65异源双体在细胞质中受一种叫IkBa/MAD-3的抑制剂调节。


 
二、NF-kappaB p65检测原理

1、IkB和p65单体结合，阻制了细胞核中的定位和DNA的结合。在体外高浓度的p65能形成同源双聚体，能和DNA微弱地结合。Poly(dI:dC)能抑制这一反应（14）。p49和p50也能形成同源双聚体，但在细胞中的浓度很低。通常，在作NF-kB的凝胶迁移实验时，在20ul的反应体积中，有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles 的NF-kB9寡核苷酸（pH7.9), 50mMKCl, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油, 0.05%NP-40。当用纯化的蛋白时，250-300ng足以形成凝胶迁移复合物，而需用10ug的HeLa细胞核抽提物。凝胶迁移复合物在室温中保温30分钟，在50mMTris(pH8.3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离凝胶迁移复合物。

2、含考马斯兰和二甲苯蓝色素的加样溶液只能加入到阴性对照反应中，因这两种色素会加剧NF-kB复合物的解离。当用HeLa细胞核抽提物作为结合蛋白来源时，可形成两种序列特异的凝胶迁移复合物，即p50/p50同源双聚体和p50/ p65异源双聚体。在表达p49，p50，p65的细胞中，可检测到4个序列特异的凝胶迁移复合物（p49/ p49，p50/ p50，p50/ p65，p49/ p65），如果存在高浓度的p65，可检测到微量的p65/p65。
 
3、下列试剂可加强NF-kB在体外的结合：mM的GTP，ATP，精胺，亚精胺，钡或钙离子，ng的Co+3(NH3)6（12）。

4、提取组织或细胞核蛋白，利用不同形式的NF-Κb p65抗体捕获细胞核蛋白并加以区分，通过酶标仪450nm处测定核蛋白标准品与NF-Κb p65吸光度值，进行定量比较，从而明确目的蛋白的活化度。
 
 
NF-KB P65_活性检测_生化试验_

公司简介

北京嘉美臻元生物技术有限公司（嘉美实验）是一家专注于生命科学领域的高科技企业，公司创立于2005年，由在国内科研试剂、实验技术、质量管理领域有着十几年从业经验的专业、专家团队组建而成；2009年在北京重组，先后成立了北京嘉美诺斯生物科技有限公司（主要开展生物相关产品进、出口业务），北京嘉美纽诺生物科技有限公司（主要为大型药厂、诊断试剂公司提供服务）。为方便实验服务项目开展，成立了北京嘉美臻元生物技术有限公司，以“嘉美实验”品牌提供实验外包服务。近五年来，公司已为全国各类科研用户提供了近5000个大大小小的专项实验外包或整体课题外包项目服务，实验项目涵盖了生命科学、医学的各研究领域。经过多年努力，公司已成为

成立日期 (10年)
注册资本 100.000000万人民币
员工人数 50-100人
年营业额 ￥ 100万-300万
经营模式 服务
主营行业 生化试剂,细胞培养,微生物学,细胞生物学,免疫安全

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