Psi2DAP 小鼠胚胎成纤维细胞

细胞名称：Psi2 DAP     小鼠胚胎成纤维细胞

组织来源：正常胚胎

培养条件：DMEM +10% FBS

形　　态：贴壁；成纤维细胞

背　　景：这株细胞生成一种可以感染小鼠细胞的载体。 Psi2 DAP细胞生成的载体编码了人类胎盘碱性磷酸酯酶基因和新霉素抗性基因。 这株细胞通过Psi2细胞插入一个重组的逆转录病毒(DAP)基因组衍生而来。 被这种Psi2 DAP产生的载体感染的细胞表达的磷酸酯酶可用组织化学方法检测，可以用作体内追踪他们命运的标记。 这些细胞也可能产生辅助病毒。

Psi2 DAP(小鼠胚胎成纤维细胞)“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数／100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。

formazan结晶的生成量仅与活Psi2 DAP(小鼠胚胎成纤维细胞)数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。

1.接种：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个接种到96孔板，每孔体积200ul.

2.Psi2 DAP(小鼠胚胎成纤维细胞)培养：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。

3.呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.

继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。

4.比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制Psi2 DAP(小鼠胚胎成纤维细胞)生长曲线。