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MICRORNA荧光定量PCR试剂盒(染料法)

MICRORNA荧光定量PCR试剂盒(染料法)

microRNA SYBR Green PCR Kit
询价20 ul 起订
北京 2022-05-18

北京百奥莱博科技有限公司

非会员

产品详情:

中文名称:
MICRORNA荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称:
microRNA SYBR Green PCR Kit
CAS号:
产品类别:
活体检测

microRNA荧光定量PCR试剂盒(SYBR Green荧光染料)采用特异性的上下游引物对反转录所得microRNA的cDNA产物进行定量检测。不同于其它公司的单条特异性引物扩增方法,Biorab采用双向特异性扩增引物(原理如图1),从而极大提高了miRNA的检测特异性,其可以区分极高相似度的miRNA分子、减少非特异性扩增(图2,3所示)。该miRNA荧光定量PCR试剂盒对可以对任何miRNA分子进行检测。miRNA荧光定量PCR试剂盒共有一万余种,试剂盒编号为MTAXXXXX,每一个miRNA分子对应一个检测试剂盒,可下载SYBR Green miRNA qPCR kit列表查询。如果您研究的miRNA分子不在我们的列表中,请来信咨询,我们将及时给您优化设计。该试剂盒中的每一对引物均经过设计优化,确保扩增效率和特异性。

microRNA荧光定量PCR试剂盒(染料法)原理图
microRNA荧光定量PCR试剂盒(染料法)高效扩增miRNA
microRNA荧光定量PCR试剂盒(染料法)可以有效区分相似度很高的miRNA

产品组成:

组分
MTAXXXXX(100T)
2×Hi SYBR Green qPCR Mix
1ml
50×ROX Reference Dye
200μl
microRNA Primer F(10μM)
100μl
microRNA Primer R(10μM)
100μl
microRNA 标准品(1pM)
100μl


储存:请置于-20℃,可保存2年;避免反复冻融。

操作方法:

1.按以下组分配制反转录反应液(反转录反应需购买我司的一步法microRNA反转录试剂盒):

模板
microRNA
0.01-0.1μg
Total RNA
0.1-2μg
4×One step miRNA RT Solution
5μl
10×miRNA RT Primer
2μl
Rnase-Free H2O
Up to 20μl



2.在PCR 仪上按以下条件进行反应:
  37℃——————60min
  95℃——————5分钟
3.获得 cDNA 产物后使用microRNA 荧光定量 PCR 试剂盒进行 miRNA 定量检测。根据机型选择步骤A或B配制反应体系:
步骤A:需要添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR 仪,包括:ABI PRISM 7900HT、7300、7500 Real-TimePCR(Applied Biosystems);Mx3000P(Stratagene)等。按照如下组分配制 20μl PCR 反应体系:

加入物
加入量
终浓度
2×Hi SYBR Green qPCR Mix
10μl
50×ROX Reference Dye
0.4μl
miRNA Primer F(10μM)
0.4μl
 
miRNA Primer R(10μM)
0.4μl
 
cDNA 模板
1~2.5μl
 
ddH2O
Up to 20μl
 


注:引物初次使用请用0.4μl,视实验结果进行调整。
步骤B:无需添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的RealTime PCR 仪,包括:LightCycler(Roche Diagnostics);MiniOpticon、Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-TimePCR(Bio-Rad & MJ);Line-Gene(Bioer,杭州博日)等。按照如下组分配制 20μl PCR 反应体系:

加入物
加入量
终浓度
2×Hi SYBR Green qPCR Mix
10μl
miRNA Primer F(10μM)
0.4μl
 
miRNA Primer R(10μM)
0.4μl
 
cDNA 模板
1~2.5μl
 
ddH2O
Up to 20μl
 


注:引物初次使用请用0.4μl,视实验结果进行调整。

4.进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法,程序如下:

程序
温度
时间
循环数
Stage 1:
95℃
15分钟
 
Stage 2:
95℃
10s
 
 
60℃
30s
35cycles
Stage 3:
Dissociation analysis


注意:使用该方法通常可以准确检测到>0.01fM的microRNA 分子,过多的循环数会造成精确性降低。推荐的循环数为 30 个,在检测极低样品浓度时可将循环数调整到 35 个。

5.扩增结果分析和数据处理:
反应结束后确认 Real-Time PCR的cDNA 样品和 NTC 阴性对照的扩增曲线和融解曲线。
microRNA荧光定量PCR试剂盒(染料法)扩增曲线和融解曲线

6.标准品的使用
  该试剂盒配备的标准品为单链 DNA 分子,其与目标microRNA 分子反转录产物完全相同,因此可直接用于 PCR扩增,从而检测 PCR 体系的可靠性。其浓度为 1pM,通常20μl PCR 体系中加入1μl,可获得 Ct 值在15 左右的数据。除此外,可以使用TE Buffer 进行稀释,最低可稀释到0.01fM,用于标准曲线扩增或绝对定量试验。

常用内参miRNA荧光定量PCR试剂盒(染料法)

货号
内参名称
适用物种
MTA01501
RNU6B
哺乳动物
MTA01502
RNU48
MTA01503
RNU44
MTA01504
SnoRNA135
MTA01505
SnoRNA202
MICRORNA荧光定量PCR试剂盒_荧光定量_PCR试剂盒_

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