碧云天生产的盐酸乙醇超快速分化液(Acid Alcohol Superfast Differentiation Solution)是一种用于苏木素染色、苏木素伊红染色(HE染色)或Masson染色等涉及苏木素染色时,非常快速地降低细胞浆等背景性的苏木素染色并使细胞核苏木素染色更清晰的溶液。
碧云天生产的盐酸乙醇超快速分化液,分化时间非常快,仅需2-5秒。如果希望可以精细地控制分化时间,可以考虑选购盐酸乙醇慢速分化液(C0161)或盐酸乙醇快速分化液(C0163)。
使用本产品可获得更好的苏木素染色效果。本产品的基本原理是在酸性条件下,可以有效洗去细胞核以外的苏木素染色,从而降低背景;同时,也可以使细胞核着色过深的区域染色适当减弱,使染色更清晰。
苏木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining),也被称作苏木精染色,是最常用的组织和细胞的染色方法之一。无色的苏木素(hematoxylin)氧化后形成有醌环结构(quinoid ring)的氧化苏木素(hematein or haematein),从而可以和三价的铝离子、铁离子等形成有颜色的带正电荷的复合物(如hematein-Al3+ complexes)。氧化苏木素(也称氧化苏木精)和铝离子等形成有色的复合物的过程也被称为Dye Lake Formation。细胞核内基因组DNA的双螺旋结构中,双链上的磷酸基团向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的氧化苏木素复合物结合,从而形成细胞核染色。苏木素染色液有多种不同的配制方法,不同的方法可以把细胞核染色成不同深浅的蓝色或蓝紫色。
苏木素是优良的细胞核染色剂,但由于细胞质中RNA和线粒体DNA的存在,也会导致细胞质中出现非预期的染色。因此苏木素染色后经常会出现细胞质有较高背景或细胞核染色过深的情况。盐酸乙醇分化液的作用主要通过溶液中的pH值等以弱化氧化苏木素和RNA或DNA形成有色的复合物从而使细胞质中几乎没有苏木素染色,而细胞核的苏木素染色比较适中。分化过程中,细胞核中的苏木素染色在酸性条件下呈现红色,当细胞核的颜色达到适宜程度时,立刻用自来水洗涤以终止分化,此时细胞核中苏木素染色在近中性的条件下而转变为蓝色,称为返蓝或发生蓝化作用。分化的适宜程度是指经水洗返蓝后用显微镜观察,细胞核膜特别是细胞核染色质的形态结构清晰,而细胞浆及其它部分基本没有背景染色,后续再用伊红染色,就能获得细胞核与细胞浆蓝红相映、鲜艳漂亮的染色结果。如果分化不充分,细胞核为深蓝色,不能辩认出核膜及染色质的形态结构,且细胞浆等仍有浅蓝色背景,经伊红染色后即成红紫色,会影响观察效果。如果分化过度,细胞核染色会呈现浅蓝色,导致仅能看出轮廓甚至模糊不清。
本盐酸乙醇分化液的组分经过反复优化,分化速度非常快,通常仅需分化2-5秒左右,可以非常快速地完成分化,特别适合对于苏木素染色分化操作非常熟练的实验人员。苏木素染色后的组织切片经本分化液分化处理后,核质着色更加清晰分明。本产品用于石蜡切片苏木素染色后的分化前后同一视野效果图参考图1。
图1. 本产品用于小鼠睾丸石蜡切片苏木素染色后同一视野分化前后的实拍效果图。左图为未经分化处理的效果图,右图为经本产品分化处理后的效果图。从图中可见,经本产品分化处理后,苏木素染色的细胞核呈现蓝色,核质清晰分明,背景呈现纯净的白色。本图仅作参考,不同的样品不同的检测条件,实际获得的结果可能有所差别。Scale bar, 100μm。