猪脊髓星形胶质细胞

猪脊髓星形胶质细胞

基于胰蛋白酶-EDTA消化技术从巴马小型猪脊髓星形胶质组织中分离原代胶质细胞，在含INS/FGF的基础培养基中培养扩增；利用Nanostring数字计数结合免疫组化(IHC)对S100β, AQP4进行多参数检测，并通过钙流检测验证目标蛋白的表达与功能。

产品名称：猪脊髓星形胶质细胞

英文名称： Porcine Spinal Cord Astrocytes

组织来源： 脑组织

默认种属 ：猪

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的猪脊髓星形胶质细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的猪脊髓星形胶质细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 猪脊髓星形胶质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 星形

传代比例： 1:3

传代特性： 可传5-8代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

猪脊髓星形胶质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。

2. 提前配制冰预冷Hanks液、消化液（Ⅳ型胶原酶、胰蛋白酶）、DNA酶Ⅰ、Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX（38.5℃预热）、双抗溶液。

3. 健康巴马小型猪（15-20kg），氯胺酮联合阿托品肌注麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。

二、取材与预处理

1. 过量麻醉剂心脏采血后处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出脑组织。

2. 浸入冰预冷Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。

3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块加入Ⅳ型胶原酶+胰蛋白酶混合消化液，38.5℃消化44min，间断吹打。

2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。

3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。

2. 沉淀细胞用Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-240000.0cells/cm²密度接种。

3. 放入38.5℃、5% CO2恒温培养箱，每3天换液一次，镜检观察多突起状，贴壁生长，可见神经突延伸及生长状态。

取材时必须在冰上低温操作，30分钟内完成脊髓组织的分离与纯化处理，室温暴露时间过长会直接导致细胞活性下降40%以上。

实验用培养皿应提前用0.01%聚鸟氨酸室温孵育2小时，PBS洗涤后风干，该预处理对髓星形胶质的初始贴附具有决定性作用。

该细胞属于贴壁依赖性细胞，体外增殖速度适中，建议每3天更换一次培养基，传代时按1:3比例操作，避免过度融合导致接触抑制。

培养体系中需添加DMEM/F12含10% FBS、1% P/S和10ng/ml BDNF，血清应选用优质胎牛血清(FBS)，批次间差异可能显著影响细胞生长，建议同一实验使用同一批次血清。

日常维护中需每日检查细胞形态和培养基颜色，出现浑浊或颜色异常应立即换液并排查污染，传代后24小时内避免换液以利于细胞贴附恢复。