产品名称 | 猪雪旺氏细胞 | 组织来源 | 神经组织 |
英文名称 | Porcine Schwann Cells | 种属 | 猪 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3546 |
方法简介 实验室分离的猪雪旺氏细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的猪雪旺氏细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 猪雪旺氏细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传8-10代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
猪雪旺氏细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：4-6月龄长白猪，体重12-18kg，单只取材获1.5-3.5×10⁶个细胞，活率>90%
试剂：胶原酶Type IV、Dispase、胰蛋白酶、FBS、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
组织取材后迅速放入预冷PBS中转运，无菌操作下剔除周围组织，剪碎后加入胶原酶Type IV、Dispase、胰蛋白酶、FBS于37℃消化30-60分钟
消化液经100目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、400g离心10分钟收集细胞沉淀
细胞沉淀重悬于含10% FBS的培养基中，经Ficoll密度梯度离心（400g，10分钟）纯化目标细胞
原代培养要点
调整细胞密度至3×10⁴接种于预处理培养皿，37℃、5% CO₂培养箱培养
原代细胞贴壁生长，形态典型，接种后48小时开始增殖，第5-7天可达到亚融合状态
常见问题优化
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠混合功能氧化酶(MFO)elisa试剂盒 | I2.1人急性淋巴细胞 |
大鼠乳脂球表皮生长因子8(MFGE8)elisa试剂盒 | C3A (HepG2/C3A)肝 |
大鼠微纤丝关联蛋白4(MFAP4)elisa试剂盒 | NCI-H2342非小细胞肺 |
大鼠镍纹蛋白样蛋白(METRNL)elisa试剂盒 | NCI-H1648非小细胞肺 |
大鼠黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶(GPT)elisa试剂盒 | LU99C非小细胞肺 |
大鼠黄嘌呤氧化还原酶(XOR)elisa试剂盒 | COLO 679黑 |
小鼠粘蛋白2（MUC2）elisa试剂盒 | NCI-H522非小细胞肺 |
C6大鼠脑胶质瘤细胞专用培养基 | DET1基因过表达细胞株 |
MEF(丝裂霉素C处理)小鼠胚胎成纤维细胞专用培养基 | CLEC4M基因过表达细胞株 |
兔原代脑动脉平滑肌细胞专用培养基 | FBXO34基因过表达细胞株 |
CCD-18Co细胞专用培养基 | CREB3L3基因过表达细胞株 |
人原代肺动脉平滑肌细胞专用培养基 | LMBRD2基因过表达细胞株 |
猪雪旺氏细胞大鼠原代成骨细胞专用培养基 | ADAM30基因过表达细胞株 |
CHL细胞专用培养基 | AMPD3基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷Hanks液、胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. 健康巴马小型猪（15-20kg），氯胺酮联合阿托品肌注麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 过量麻醉剂心脏采血后处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取神经嵴细胞组织，冰预冷Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅳ消化液，38.5℃水浴消化39min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 38.5℃、5% CO2培养，每2-3天换液一次，定期倒置显微镜观察长梭形或星形，贴壁生长，可形成神经管样结构及生长情况。
