产品名称 | 鸡主动脉内皮细胞 | 组织来源 | 主动脉组织 |
英文名称 | Chicken Aortic Endothelial Cells | 种属 | 鸡 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3633 |
方法简介 实验室分离的鸡主动脉内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的鸡主动脉内皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 鸡主动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
鸡主动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SPF级鸡胚（ECF日龄），每枚胚可分离0.5-1.5×10⁶个细胞，活力>85%
试剂：胰蛋白酶-EDTA、胶原酶、Dispase、FBS、BME培养基
分离纯化步骤
取材组织经PBS清洗去除血液和杂质，剪碎至1mm³大小，加入胰蛋白酶-EDTA、胶原酶、Dispase、FBS于37℃振荡消化30-60分钟
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
内皮细胞生长需要较高的血清浓度和血管内皮生长因子支持，注意维持培养基新鲜度
常见问题优化
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
大鼠3甲氧基4羟基苯乙二醇(MHPG)elisa试剂盒 | JM1人急性B淋巴细胞 |
大鼠主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ)elisa试剂盒 | HCC-2279非小细胞肺 |
大鼠高铁血红蛋白(MHB)elisa试剂盒 | Mv1lu貂肺上皮细胞 |
大鼠谷氨酸受体5亚型(mGluR5)elisa试剂盒 | HI9-7/IGF-IR大鼠脑海马体成纤维细胞 |
大鼠环磷酸鸟苷(cGMP)elisa试剂盒 | RLE-6TN大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞 |
大鼠环磷酰胺(CTX)elisa试剂盒 | NCI-H1915非小细胞肺 |
小鼠整合素α5（ITGα5）elisa试剂盒 | KMS-27多发性骨髓 |
A7r5大鼠胸大动脉平滑肌细胞专用培养基 | TRIM56基因过表达细胞株 |
MC38+LUC小鼠结肠癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | DACH1基因过表达细胞株 |
人原代宫颈成纤维细胞专用培养基 | CEP295NL基因过表达细胞株 |
Calu-3细胞专用培养基 | FRK基因过表达细胞株 |
人原代附睾成纤维细胞专用培养基 | CWC25基因过表达细胞株 |
鸡主动脉内皮细胞大鼠原代鼻腔粘膜上皮细胞专用培养基 | DTX4基因过表达细胞株 |
CCD-18Co细胞专用培养基 | SLC6A16基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷PBS液、消化液（Ⅳ型胶原酶、弹性蛋白酶）、透明质酸酶、DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗（39℃预热）、双抗溶液。
3. SPF级鸡胚（EGK阶段鸡胚），42℃水浴灭活麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 无菌条件下取胚组织，碘伏消毒术野，无菌操作取出心脏组织。
2. 浸入冰预冷PBS液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入Ⅳ型胶原酶+弹性蛋白酶混合消化液，39℃消化35min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用Percoll密度梯度离心纯化内皮细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-200000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入39℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察鹅卵石样铺路石状排列，贴壁生长，细胞边界清晰及生长状态。
