产品名称 | 鸡滑膜细胞 | 组织来源 | 滑膜组织 |
英文名称 | Chicken Synovial Cells | 种属 | 鸡 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3631 |
方法简介 实验室分离的鸡滑膜细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的鸡滑膜细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 鸡滑膜细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
鸡滑膜细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SPF级鸡胚（ECF日龄），每枚胚可分离0.5-1.5×10⁶个细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、胶原酶Type IV、DNase I、BSA、RPMI-1640
分离纯化步骤
取目标组织用无钙镁PBS洗涤3次，剔除脂肪和结缔组织后剪成小碎片，加入0.25%胰蛋白酶、胶原酶Type IV、DNase I、BSA消化30-60分钟
细胞悬液依次过100目、200目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
细胞在体外培养条件下生长稳定，形态保持一致性，连续培养3-5代后仍保持原有表型特征
常见问题优化
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
大鼠γ干扰素诱导单核因子(MIG;CXCL9)elisa试剂盒 | Hs611.T人霍奇金淋巴瘤细胞 |
大鼠肌球蛋白重链β(MHC-β)elisa试剂盒 | SV30160耳蜗鼓膜上皮细胞 |
大鼠主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ)elisa试剂盒 | DITNC1大鼠脑间质细胞 |
大鼠基质Gla蛋白(MGP)elisa试剂盒 | A-431表皮鳞状细胞 |
大鼠环孢素A(CsA)elisa试剂盒 | NB-4白血 |
大鼠环磷酸鸟苷(cGMP)elisa试剂盒 | LU99B非小细胞肺 |
小鼠整合素αVβ3（ITG αⅤβ3）elisa试剂盒 | ND7/23大鼠神经母细胞 |
9L/lacZ大鼠胶质肉瘤细胞专用培养基 | A4GNT基因过表达细胞株 |
MC38小鼠结肠癌细胞专用培养基 | GP1BA基因过表达细胞株 |
小鼠原代小肠粘膜上皮细胞专用培养基 | ECM2基因过表达细胞株 |
CAL-62细胞专用培养基 | LMBRD2基因过表达细胞株 |
人原代附睾平滑肌细胞专用培养基 | SCNN1D基因过表达细胞株 |
鸡滑膜细胞大鼠原代半月板纤维软骨细胞专用培养基 | ACSM1基因过表达细胞株 |
CBRH7919细胞专用培养基 | FLVCR1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷PBS液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶）、胰蛋白酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗（39℃预热）、双抗溶液。
3. SPF级鸡胚（EGK阶段鸡胚），42℃水浴灭活麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 无菌条件下取胚组织，碘伏消毒术野，无菌操作取出其他组织。
2. 浸入冰预冷PBS液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液，39℃消化44min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-240000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入39℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察形态因细胞类型而异，贴壁或悬浮生长及生长状态。
