产品名称 | 鸡软骨细胞 | 组织来源 | 软骨组织 |
英文名称 | Chicken Chondrocytes | 种属 | 鸡 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3630 |
方法简介 实验室分离的鸡软骨细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的鸡软骨细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 鸡软骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 多边形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
鸡软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SPF级鸡胚（ECF日龄），每枚胚可分离0.5-1.5×10⁶个细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、胶原酶Type IV、DNase I、BSA、BME培养基
分离纯化步骤
组织块经Hanks液反复冲洗后剪碎，加入0.25%胰蛋白酶、胶原酶Type IV、DNase I、BSA于37℃水浴消化120-180分钟，期间间歇振荡
消化液经70目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、500g离心12分钟收集细胞沉淀
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按2×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
细胞贴壁生长较慢，需5-7天方可达到亚融合，期间注意维持培养基新鲜度
常见问题优化
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
大鼠巨噬细胞炎性蛋白(MIP)elisa试剂盒 | HDLM-2人霍奇金淋巴瘤细胞 |
大鼠3甲氧基4羟基苯乙二醇(MHPG)elisa试剂盒 | Delta-47多发性骨髓 |
大鼠主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ)elisa试剂盒 | F11大鼠背根神经节细胞 |
大鼠高铁血红蛋白(MHB)elisa试剂盒 | NOMO-1白血 |
大鼠环孢素(Cs)elisa试剂盒 | Jurkat, Clone E6-1白血 |
大鼠环化核苷酸调控阳离子通道蛋白亚型4(HCN4)elisa试剂盒 | KNS-62非小细胞肺 |
小鼠整合素β1（ITGβ1）elisa试剂盒 | CA-77大鼠甲状腺髓样细胞 |
YAC-1小鼠淋巴瘤细胞专用培养基 | ASIC3基因过表达细胞株 |
MB49+LUC小鼠膀胱癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | FBXO34基因过表达细胞株 |
大鼠原代乳腺成纤维细胞专用培养基 | CHDH基因过表达细胞株 |
CAL-51细胞专用培养基 | BBOF1基因过表达细胞株 |
人原代腹膜间皮细胞专用培养基 | ADAM30基因过表达细胞株 |
鸡软骨细胞大鼠原代α-SMA阳性肾周肌成纤维细胞专用培养基 | ARHGEF39基因过表达细胞株 |
Caski 细胞专用培养基 | CGAS基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷PBS液、消化液（Ⅱ型胶原酶+透明质酸酶）+胰蛋白酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗 + 10ng/mL TGF-β、双抗。
3. SPF级鸡胚（EGK阶段鸡胚），42℃水浴灭活，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 无菌条件下取胚组织，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取软骨。
2. 置于冰预冷PBS液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的软骨组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与Ⅱ型胶原酶+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，39℃振荡消化41min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，1次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。
2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗 + 10ng/mL TGF-β调整细胞浓度至110000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。
3. 置于39℃、5% CO2培养箱中培养，每3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及圆形或椭圆形，贴壁生长，胞质丰富，可见基质分泌。
