产品名称 | 鸡脂肪间充质干细胞 | 组织来源 | 脂肪组织 |
英文名称 | Chicken Adipose Mesenchymal Stem Cells | 种属 | 鸡 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3626 |
方法简介 实验室分离的鸡脂肪间充质干细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的鸡脂肪间充质干细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 鸡脂肪间充质干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传10代以上
消化液： 0.25%胰蛋白酶
鸡脂肪间充质干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：8-10日龄白来航鸡胚，每只可得0.6-1.8×10⁶个目标细胞，活力>87%
试剂：中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、Hanks液、MEM培养基
分离纯化步骤
组织块经Hanks液反复冲洗后剪碎，加入中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、Hanks液于37℃水浴消化60-120分钟，期间间歇振荡
消化产物经100目滤网过滤，PBS洗涤1次，300g离心10分钟收集细胞沉淀
采用预混合抗体标记+磁珠分选策略，特异性富集目标细胞，纯度>85%
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
原代干细胞贴壁效率较低，建议适当提高接种密度以保证存活率
常见问题优化
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
大鼠巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)elisa试剂盒 | HEp-2人喉表皮样癌细胞 |
大鼠巨噬细胞炎性蛋白1(MIP-1)elisa试剂盒 | CHO-K1仓鼠卵巢细胞亚株 |
大鼠γ干扰素诱导单核因子(MIG;CXCL9)elisa试剂盒 | 707.fl白血 |
大鼠肌球蛋白重链β(MHC-β)elisa试剂盒 | U87MG人脑星形胶质母细胞 |
大鼠花生四烯酸5-脂氧合酶(alox5)elisa试剂盒 | TE-12人食管细胞 |
大鼠花生四烯酸脂氧合酶代谢产物(AAL)elisa试剂盒 | MHCC97-L/LUC (STR)低转移人肝细胞 |
小鼠支原体（MCP）elisa试剂盒 | HL-60 Clone 15白血 |
TM4正常小鼠睾丸Sertoli细胞专用培养基 | CNGB3基因过表达细胞株 |
MA-891小鼠乳腺癌高转移细胞专用培养基 | GUCY1A2基因过表达细胞株 |
兔原代骨髓单核细胞专用培养基 | DRD3基因过表达细胞株 |
Caki-1细胞专用培养基 | CCR1基因过表达细胞株 |
人原代肝癌相关成纤维细胞专用培养基 | GFOD1基因过表达细胞株 |
鸡脂肪间充质干细胞大鼠原代DC细胞专用培养基 | WDR24基因过表达细胞株 |
Calu-6细胞专用培养基 | TRIM56基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷PBS液、消化液（胶原酶Ⅰ+BSA）+透明质酸酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、双抗。
3. SPF级鸡胚（EGK阶段鸡胚），42℃水浴灭活，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 无菌条件下取胚组织，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取脂肪。
2. 置于冰预冷PBS液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的脂肪组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与胶原酶Ⅰ+BSA+透明质酸酶混合酶液按1:3比例混合，39℃振荡消化44min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。
2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗调整细胞浓度至140000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。
3. 置于39℃、5% CO2培养箱中培养，每2-3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及圆形，贴壁生长，胞质内可见脂滴空泡。
