产品名称 | 鸡肺微血管内皮细胞 | 组织来源 | 肺组织 |
英文名称 | Chicken Pulmonary Microvascular Endothelial Cells | 种属 | 鸡 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3625 |
方法简介 实验室分离的鸡肺微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的鸡肺微血管内皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 鸡肺微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
鸡肺微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SPF级鸡胚（ECF日龄），每枚胚可分离0.5-1.5×10⁶个细胞，活力>85%
试剂：中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、Hanks液、DMEM/F12完全培养基
分离纯化步骤
取目标组织用无钙镁PBS洗涤3次，剔除脂肪和结缔组织后剪成小碎片，加入中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、Hanks液消化30-45分钟
消化液经100目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、400g离心10分钟收集细胞沉淀
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
调整细胞浓度至1-2×10⁵，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
内皮细胞呈鹅卵石样铺路石状排列，贴壁后24小时内开始伸展，48小时形成单层
常见问题优化
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
大鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α;CCL20)elisa试剂盒 | TU-138交叉人喉癌细胞 |
大鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α;CCL3)elisa试剂盒 | P116白血 |
大鼠巨噬细胞炎性蛋白(MIP)elisa试剂盒 | HBVAF人脑外膜成纤维细胞 |
大鼠3甲氧基4羟基苯乙二醇(MHPG)elisa试剂盒 | THLE-2人正常肝细胞 |
大鼠琥珀酰辅酶A合成酶(SCS)elisa试剂盒 | SW480人腺细胞 |
大鼠花生四烯酸5-脂氧合酶(alox5a)elisa试剂盒 | PC12大鼠肾上腺嗜铬细胞 |
小鼠脂蛋白a（Lp-a）elisa试剂盒 | COS-1转化的非洲绿猴肾细胞 |
TM4正常小鼠睾丸Sertoli细胞专用培养基 | BPIFC基因过表达细胞株 |
MA-891小鼠乳腺癌高转移细胞专用培养基 | USP51基因过表达细胞株 |
小鼠原代神经胶质细胞专用培养基 | DNAI2基因过表达细胞株 |
Caco-2细胞专用培养基 | AMIGO3基因过表达细胞株 |
人原代肝成纤维细胞专用培养基 | BTBD9基因过表达细胞株 |
鸡肺微血管内皮细胞大鼠原代B淋巴细胞专用培养基 | DET1基因过表达细胞株 |
Calu-3细胞专用培养基 | B3GNT4基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷PBS液、消化液（Ⅳ型胶原酶、透明质酸酶）、弹性蛋白酶、DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗（39℃预热）、双抗溶液。
3. SPF级鸡胚（EGK阶段鸡胚），42℃水浴灭活麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 无菌条件下取胚组织，碘伏消毒术野，无菌操作取出肺组织。
2. 浸入冰预冷PBS液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入Ⅳ型胶原酶+透明质酸酶混合消化液，39℃消化44min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用Percoll密度梯度离心纯化内皮细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-240000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入39℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察鹅卵石样铺路石状排列，贴壁生长，细胞边界清晰及生长状态。
