产品名称 | 兔嗅球细胞 | 组织来源 | 嗅球组织 |
英文名称 | Rabbit Olfactory Bulb Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3857 |
方法简介 实验室分离的兔嗅球细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔嗅球细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔嗅球细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 神经元样
传代比例： -
传代特性： 不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔嗅球细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2-3月龄新西兰大白兔，体重2.0-2.5kg，每只可获得1.5-3.0×10⁶个细胞，活力>88%
试剂：中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS、RPMI-1640培养基
分离纯化步骤
组织块经Hanks液反复冲洗后剪碎，加入中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS于37℃水浴消化15-30分钟，期间间歇振荡
消化液经70目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、300g离心8分钟收集细胞沉淀
利用免疫磁珠分选技术（MACS）纯化目标细胞，纯度可达85%以上
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按2×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
细胞贴壁生长良好，增殖活性稳定，换液周期为2-3天，培养过程中注意观察细胞形态变化
常见问题优化
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
大鼠混合谱系激酶域样蛋白(MLKL)elisa试剂盒 | TF-1 (STR)人红系白血病细胞 |
大鼠平滑肌肌球蛋白轻链激酶(MLCK)elisa试剂盒 | TJ905人脑胶质 |
大鼠中期因子(MK)elisa试剂盒 | SK-MEL-2+LUC人皮肤黑色细胞荧光酶标记 |
大鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α;CCL20)elisa试剂盒 | Raji人淋巴细胞 |
大鼠黑素浓集素(MCH)elisa试剂盒 | OS-RC-2人肾细胞 |
大鼠红细胞C3b受体(RBC-C3bR)elisa试剂盒 | Jurkat白血 |
小鼠脂肪酶（Lipase）elisa试剂盒 | SK-OV-3+LUC人卵巢细胞荧光酶标记 |
TC-1小鼠肺上皮细胞专用培养基 | GPR101基因过表达细胞株 |
L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)小鼠淋巴瘤细胞专用培养基 | ECM2基因过表达细胞株 |
大鼠原代心肌细胞专用培养基 | ESR2基因过表达细胞株 |
C666-1细胞专用培养基 | ADAM30基因过表达细胞株 |
人原代肝内胆管上皮细胞专用培养基 | ACSM1基因过表达细胞株 |
兔嗅球细胞大鼠乳腺成纤维细胞永生化细胞专用培养基 | PCDHB11基因过表达细胞株 |
CAL-27细胞专用培养基 | GNAT1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷D-Hanks液、Ⅳ型胶原酶+胰蛋白酶混合消化液、Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取脑组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入Ⅳ型胶原酶消化液，37℃水浴消化30min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每3天换液一次，定期倒置显微镜观察多突起状，贴壁生长，可见神经突延伸及生长情况。
