产品名称 | 兔髋臼软骨细胞 | 组织来源 | 髋臼软骨组织 |
英文名称 | Rabbit Acetabular Chondrocytes | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3856 |
方法简介 实验室分离的兔髋臼软骨细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔髋臼软骨细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔髋臼软骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 多边形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔髋臼软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2-3月龄新西兰大白兔，体重2.0-2.5kg，每只可获得1.5-3.0×10⁶个细胞，活力>88%
试剂：胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液、MEM培养基
分离纯化步骤
组织取材后迅速放入预冷PBS中转运，无菌操作下剔除周围组织，剪碎后加入胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液于37℃消化120-180分钟
细胞悬液依次过70目、100目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
细胞沉淀重悬于含10% FBS的培养基中，经Ficoll密度梯度离心（500g，12分钟）纯化目标细胞
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按2×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
细胞贴壁生长较慢，需5-7天方可达到亚融合，期间注意维持培养基新鲜度
常见问题优化
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
大鼠甲基丙二酰单酰辅酶A脱羧酶(MMD)elisa试剂盒 | RD-LUC-PURO人横纹肌肉瘤细胞 |
大鼠肌球蛋白轻链激酶(MLCK)elisa试剂盒 | SW620人结直肠腺细胞 |
大鼠甲基化酶(ML)elisa试剂盒 | SCC-9人类舌细胞 |
大鼠巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5;CCL15)elisa试剂盒 | OVCAR-3人卵巢腺细胞 |
大鼠黑色素细胞抗体(MC Ab)elisa试剂盒 | NCI-H82人小细胞肺细胞 |
大鼠横纹肌辅肌动蛋白α(smActinin-α)elisa试剂盒 | WI38/VA13 (STR)转化细胞 |
小鼠脂肪酸β氧化酶（FAβO）elisa试剂盒 | SK-HEP-1人腺细胞 |
TC-1小鼠肺上皮细胞专用培养基 | B3GNT5基因过表达细胞株 |
L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)小鼠淋巴瘤细胞专用培养基 | CHDH基因过表达细胞株 |
兔原代肺肌成纤维细胞专用培养基 | FRK基因过表达细胞株 |
C643细胞专用培养基 | ZNF366基因过表达细胞株 |
人原代肝实质细胞专用培养基 | ARHGEF39基因过表达细胞株 |
兔髋臼软骨细胞大鼠内皮祖细胞永生化细胞专用培养基 | CEP85L基因过表达细胞株 |
Caki-2细胞专用培养基 | CNGB3基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ）、透明质酸酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗 + 10ng/mL TGF-β（37℃预热）、双抗溶液。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出关节组织。
2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入胶原酶Ⅰ+胶原酶Ⅱ混合消化液，37℃消化48min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗 + 10ng/mL TGF-β重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-230000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每3天换液一次，镜检观察圆形或椭圆形，贴壁生长，胞质丰富，可见基质分泌及生长状态。
