产品名称 | 兔肺动脉内皮细胞 | 组织来源 | 肺组织 |
英文名称 | Rabbit Pulmonary Artery Endothelial Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3839 |
方法简介 实验室分离的兔肺动脉内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔肺动脉内皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔肺动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔肺动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：3-4月龄日本大耳兔，体重2.5-3.0kg，单只取材获1.2-2.8×10⁶个细胞，活率>90%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA、DMEM/F12完全培养基
分离纯化步骤
取目标组织用无钙镁PBS洗涤3次，剔除脂肪和结缔组织后剪成小碎片，加入0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA消化30-45分钟
消化产物经100目滤网过滤，PBS洗涤1次，400g离心10分钟收集细胞沉淀
采用预混合抗体标记+磁珠分选策略，特异性富集目标细胞，纯度>90%
原代培养要点
调整细胞密度至1-2×10⁵接种于预处理培养皿，37℃、5% CO₂培养箱培养
内皮细胞呈鹅卵石样铺路石状排列，贴壁后24小时内开始伸展，48小时形成单层
常见问题优化
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
大鼠甘露糖受体C1(MRC1)elisa试剂盒 | MNNG/HOSCl#5人骨肉瘤细胞 |
大鼠巯基丙酮酸硫转移酶(MPST)elisa试剂盒 | HT-1080人纤维肉细胞 |
大鼠髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质IgG抗体(MPO-ANCA IgG)elisa试剂盒 | hccc-9810人胆管细胞型肝细胞 |
大鼠膜结合型前列腺素E合成酶1(mPGEs-1)elisa试剂盒 | DLD-1人结直肠腺细胞 |
大鼠核糖体蛋白S7(RPS7)elisa试剂盒 | CFPAC-1人胰腺细胞 |
大鼠核因子E2相关因子2(Nrf2)elisa试剂盒 | LS174T人结直肠腺细胞 |
小鼠脂酰辅酶A合成酶（ACS）elisa试剂盒 | HEC-1-B人子宫膜腺细胞 |
RM-1小鼠前列腺癌细胞专用培养基 | ZNF616基因过表达细胞株 |
HT-22小鼠海马神经元细胞专用培养基 | CYP27C1基因过表达细胞株 |
人原代蜕膜成纤维细胞专用培养基 | PCDHB1基因过表达细胞株 |
BT-20细胞专用培养基 | DET1基因过表达细胞株 |
人原代宫颈上皮细胞专用培养基 | A4GNT基因过表达细胞株 |
兔肺动脉内皮细胞WSU-HN30细胞专用培养基 | GPR101基因过表达细胞株 |
C166细胞专用培养基 | AGXT基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（Ⅳ型胶原酶+透明质酸酶）+弹性蛋白酶、DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗、双抗。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取肺。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的肺组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与Ⅳ型胶原酶+透明质酸酶+弹性蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化47min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用Percoll密度梯度离心纯化内皮细胞，去除未消化组织块。
2. 用DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗调整细胞浓度至120000.0cells/mL，接种于预涂胶原的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2-3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及鹅卵石样铺路石状排列，贴壁生长，细胞边界清晰。
