产品名称 | 兔鼻黏膜上皮细胞 | 组织来源 | 鼻黏膜组织 |
英文名称 | Rabbit Nasal Mucosa Epithelial Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3838 |
方法简介 实验室分离的兔鼻黏膜上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔鼻黏膜上皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔鼻黏膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔鼻黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2-3月龄新西兰大白兔，体重2.0-2.5kg，每只可获得1.5-3.0×10⁶个细胞，活力>88%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
取材组织经PBS清洗去除血液和杂质，剪碎至1mm³大小，加入0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA于37℃振荡消化30-60分钟
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
原代上皮细胞生长较慢，需5-7天方可达到亚融合，期间注意维持培养基中EGF浓度
常见问题优化
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
大鼠线粒体呼吸链复合物II(MRCC II)elisa试剂盒 | MNNG/HOSC1#5人骨肉瘤细胞 |
大鼠盐皮质激素受体(MR)elisa试剂盒 | HKb-20人肾上皮细胞 |
大鼠巯基丙酮酸硫转移酶(MPST)elisa试剂盒 | GM12878人B淋巴细胞 |
大鼠髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质(MPO-ANCA)elisa试剂盒 | CoC1人卵巢细胞 |
大鼠核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(p70s6k)elisa试剂盒 | Caco-2人腺细胞 |
大鼠核糖体蛋白S7(RPS7)elisa试剂盒 | KNS-89人脑胶质细胞细胞 |
小鼠脂氧素A4（LXA4）elisa试剂盒 | HCC1937人乳腺细胞 |
RM-1小鼠前列腺癌细胞专用培养基 | TP63基因过表达细胞株 |
HT-22小鼠海马神经元细胞专用培养基 | HDX基因过表达细胞株 |
小鼠原代角膜上皮细胞专用培养基 | CEACAM16基因过表达细胞株 |
BRL细胞专用培养基 | SLC6A16基因过表达细胞株 |
人原代巩膜成纤维细胞专用培养基 | ASIC3基因过表达细胞株 |
兔鼻黏膜上皮细胞WSU-DLCL2细胞专用培养基 | B3GNT5基因过表达细胞株 |
C1498细胞专用培养基 | CDH7基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷D-Hanks液、Ⅳ型胶原酶+透明质酸酶混合消化液、K-SFM培养基 + EGF + BSA、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取鼻组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入Ⅳ型胶原酶消化液，37℃水浴消化33min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用K-SFM培养基 + EGF + BSA重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2天换液一次，定期倒置显微镜观察多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接及生长情况。
