产品名称 | 兔鼻黏膜成纤维细胞 | 组织来源 | 鼻黏膜组织 |
英文名称 | Rabbit Nasal Mucosa Fibroblasts | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3837 |
方法简介 实验室分离的兔鼻黏膜成纤维细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔鼻黏膜成纤维细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔鼻黏膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔鼻黏膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2.5-3.5月龄白色家兔，体重2.2-2.8kg，每只可分离1.8-3.2×10⁶个目标细胞，活力>89%
试剂：弹性蛋白酶、胰蛋白酶、EDTA、无钙镁PBS、DMEM/F12完全培养基
分离纯化步骤
取材组织经D-Hanks液冲洗后，手工剔除杂质，剪成1-2mm³小块，加入弹性蛋白酶、胰蛋白酶、EDTA、无钙镁PBS37℃消化30-60分钟
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
采用预混合抗体标记+磁珠分选策略，特异性富集目标细胞，纯度>88%
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
贴壁细胞生长呈接触抑制，融合度达80%时需及时传代，避免过度融合导致细胞老化
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
大鼠线粒体呼吸链复合物IV(MRCC IV)elisa试剂盒 | MNNG/HOS Cl #5[R-1059-D] (STR)人骨肉瘤细胞 |
大鼠甘露糖受体C1(MRC1)elisa试剂盒 | HELA+LUC 人宫颈细胞荧光酶标记 |
大鼠线粒体膜通道孔(MPTP)elisa试剂盒 | DMS 53人肺细胞 |
大鼠髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质IgG抗体(MPO-ANCA IgG)elisa试剂盒 | CAL-27人舌鳞细胞 |
大鼠核糖核酸酶H(RNaseH)elisa试剂盒 | BALL-1人B淋巴细胞白血细胞 |
大鼠核糖体S6K蛋白激酶(S6K)elisa试剂盒 | Jeko-1人套细胞淋巴细胞 |
小鼠脂氧素B4（LXB4）elisa试剂盒 | FTC-133人甲状腺细胞 |
RGC-5小鼠视网膜神经节细胞专用培养基 | PDZD4基因过表达细胞株 |
HL-1小鼠心肌细胞专用培养基 | DCX基因过表达细胞株 |
大鼠原代海绵体平滑肌细胞专用培养基 | GFOD1基因过表达细胞株 |
BRL-3A细胞专用培养基 | CRPPA基因过表达细胞株 |
人原代骨骼肌成纤维细胞专用培养基 | ESX1基因过表达细胞株 |
兔鼻黏膜成纤维细胞WRL68细胞专用培养基 | PPM1E基因过表达细胞株 |
BxPC-3细胞专用培养基 | THNSL1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（Ⅳ型胶原酶+透明质酸酶）+胰蛋白酶、K-SFM培养基 + EGF + BSA、双抗。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取鼻。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的鼻组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与Ⅳ型胶原酶+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化38min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。
2. 用K-SFM培养基 + EGF + BSA调整细胞浓度至130000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接。
