产品名称 | 兔气管成纤维细胞 | 组织来源 | 气管组织 |
英文名称 | Rabbit Tracheal Fibroblasts | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3810 |
方法简介 实验室分离的兔气管成纤维细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔气管成纤维细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔气管成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔气管成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2.5-3.5月龄白色家兔，体重2.2-2.8kg，每只可分离1.8-3.2×10⁶个目标细胞，活力>89%
试剂：中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS、RPMI-1640培养基
分离纯化步骤
取材组织经PBS清洗去除血液和杂质，剪碎至1mm³大小，加入中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS于37℃振荡消化30-60分钟
消化产物经100目滤网过滤，PBS洗涤1次，400g离心10分钟收集细胞沉淀
细胞沉淀重悬于含10% FBS的培养基中，经Ficoll密度梯度离心（400g，10分钟）纯化目标细胞
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
原代细胞贴壁生长，形态典型，接种后48小时开始增殖，第5-7天可达到亚融合状态
常见问题优化
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
大鼠髓样分化因子88(MyD88)elisa试剂盒 | LX-2/RFP (STR)人肝星形细胞 |
大鼠粘蛋白6(MUC6)elisa试剂盒 | 大鼠DC细胞 |
大鼠粘蛋白5AC(MUC5AC)elisa试剂盒 | 猪鼻腔粘膜上皮细胞 |
大鼠粘蛋白1抗体(MUC1 Ab)elisa试剂盒 | 猪主动脉内皮细胞 |
大鼠果糖胺(Fructosamine)elisa试剂盒 | 兔鼻腔粘膜上皮细胞 |
大鼠过氧化还原酶2(PRDX2)elisa试剂盒 | J774A.1小鼠单核巨噬细胞 |
小鼠肿瘤易感基因101（TSG101）elisa试剂盒 | 羊睾丸间质细胞 |
P19小鼠畸胎瘤细胞专用培养基 | RGS9基因过表达细胞株 |
G422小鼠脑神经胶质母细胞专用培养基 | CLEC17A基因过表达细胞株 |
人原代肌腱细胞专用培养基 | B3GNT4基因过表达细胞株 |
B16-F10细胞专用培养基 | PPM1E基因过表达细胞株 |
人原代踝或膝滑成纤维细胞专用培养基 | GDF10基因过表达细胞株 |
兔气管成纤维细胞U87MG+luc细胞专用培养基 | CHST7基因过表达细胞株 |
BEAS-2B细胞专用培养基 | ATP6V1C2基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶、胰蛋白酶）、K-SFM培养基 + EGF + BSA、双抗。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取成纤维细胞。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的成纤维细胞组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化44min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。
2. 用K-SFM培养基 + EGF + BSA调整细胞浓度至140000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接。
