产品名称 | 兔胚肝间充质干细胞 | 组织来源 | 胚胎组织 |
英文名称 | Rabbit Embryonic Liver Mesenchymal Stem Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3807 |
方法简介 实验室分离的兔胚肝间充质干细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔胚肝间充质干细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔胚肝间充质干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传10代以上
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔胚肝间充质干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2.5-3.5月龄白色家兔，体重2.2-2.8kg，每只可分离1.8-3.2×10⁶个目标细胞，活力>89%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA、MEM培养基
分离纯化步骤
取材组织经D-Hanks液冲洗后，手工剔除杂质，剪成1-2mm³小块，加入0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA37℃消化40-60分钟
细胞悬液依次过100目、200目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
利用免疫磁珠分选技术（MACS）纯化目标细胞，纯度可达85%以上
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按5×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
干细胞增殖较慢，接种后3-5天可见小集落形成，7-10天可达到传代密度
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠肌球蛋白重链1(MyHC1)elisa试剂盒 | HL-7702人肝细胞 |
大鼠肌酣(Muscle)elisa试剂盒 | 人T淋巴细胞 |
大鼠粘蛋白6(MUC6)elisa试剂盒 | 猪胰腺导管上皮细胞 |
大鼠粘蛋白2(MUC2)elisa试剂盒 | 兔眼外肌成纤维细胞 |
大鼠胱抑素α1(Cys-α1)elisa试剂盒 | 兔视网膜微内皮细胞 |
大鼠果糖胺(Fructosamine)elisa试剂盒 | G422小鼠脑神经胶质母细胞 |
小鼠重链IgA（IgAH）elisa试剂盒 | 猪皮肤成纤维细胞 |
OKT11小鼠杂交瘤（抗CD2）细胞专用培养基 | ZNF546基因过表达细胞株 |
EMT6小鼠乳腺癌细胞专用培养基 | WDR24基因过表达细胞株 |
人原代视网膜色素上皮细胞专用培养基 | A4GNT基因过表达细胞株 |
B16-F10+luc细胞专用培养基 | GPR17基因过表达细胞株 |
人原代回肠粘膜上皮细胞专用培养基 | SARM1基因过表达细胞株 |
兔胚肝间充质干细胞U2OS细胞专用培养基 | LRCH1基因过表达细胞株 |
BDCM细胞专用培养基 | ADGRG3基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶、胰蛋白酶）、α-MEM + 10% FBS + 1% 双抗、双抗。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取肝脏。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的肝脏组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化35min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用Percoll密度梯度离心富集干细胞，去除未消化组织块。
2. 用α-MEM + 10% FBS + 1% 双抗调整细胞浓度至100000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及梭形或多角形，贴壁生长，核质比高，核仁明显。
