产品名称 | 兔棕色前脂肪细胞 | 组织来源 | 棕色脂肪组织 |
英文名称 | Rabbit Brown Preadipocytes | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3800 |
方法简介 实验室分离的兔棕色前脂肪细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔棕色前脂肪细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔棕色前脂肪细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔棕色前脂肪细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2-3月龄新西兰大白兔，体重2.0-2.5kg，每只可获得1.5-3.0×10⁶个细胞，活力>88%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA、MEM培养基
分离纯化步骤
组织取材后迅速放入预冷PBS中转运，无菌操作下剔除周围组织，剪碎后加入0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA于37℃消化60-120分钟
消化液经100目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、300g离心10分钟收集细胞沉淀
细胞沉淀重悬于含10% FBS的培养基中，经Ficoll密度梯度离心（300g，10分钟）纯化目标细胞
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
细胞贴壁生长良好，增殖活性稳定，换液周期为2-3天，培养过程中注意观察细胞形态变化
常见问题优化
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
大鼠还原型辅酶Ⅱ(NADPH)elisa试剂盒 | SK-HEP-1-luc-EGFP人肝癌细胞 |
大鼠NADH-辅酶Q还原酶(NADH-COQR)elisa试剂盒 | 兔牙髓干细胞 |
大鼠烟碱型乙酰胆碱受体(N-AChR)elisa试剂盒 | 兔淋巴管成纤维细胞 |
大鼠神经酰胺酶(NA)elisa试剂盒 | 兔表皮干细胞 |
大鼠固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)elisa试剂盒 | 兔子宫内膜干细胞 |
大鼠固胆固醇转运蛋白NPC1L1(NPC1L1)elisa试剂盒 | 猪骨髓间充质干细胞 |
小鼠主要碱性蛋白（MBP）elisa试剂盒 | 兔海马神经元细胞 |
NG108-15小鼠神经瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞专用培养基 | ADRA1D基因过表达细胞株 |
E0771小鼠髓样乳腺癌细胞专用培养基 | PCDHB11基因过表达细胞株 |
人原代前脂肪细胞专用培养基 | BPIFC基因过表达细胞株 |
AT-3细胞专用培养基 | AGXT基因过表达细胞株 |
人原代颊黏膜成纤维细胞专用培养基 | GNAT2基因过表达细胞株 |
兔棕色前脂肪细胞U118MG细胞专用培养基 | GOLGA8J基因过表达细胞株 |
B16细胞专用培养基 | RGS9基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷D-Hanks液、胶原酶Ⅰ+BSA混合消化液、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取脂肪组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅰ消化液，37℃水浴消化36min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2-3天换液一次，定期倒置显微镜观察圆形，贴壁生长，胞质内可见脂滴空泡及生长情况。
