产品名称 | 兔输卵管上皮细胞 | 组织来源 | 输卵管组织 |
英文名称 | Rabbit Oviduct Epithelial Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3787 |
方法简介 实验室分离的兔输卵管上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔输卵管上皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔输卵管上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔输卵管上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2.5-3.5月龄白色家兔，体重2.2-2.8kg，每只可分离1.8-3.2×10⁶个目标细胞，活力>89%
试剂：中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS、DMEM/F12完全培养基
分离纯化步骤
组织取材后迅速放入预冷PBS中转运，无菌操作下剔除周围组织，剪碎后加入中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS于37℃消化45-90分钟
细胞悬液依次过100目、200目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
细胞沉淀重悬于含10% FBS的培养基中，经Ficoll密度梯度离心（400g，10分钟）纯化目标细胞
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
上皮细胞贴壁生长，呈多角形铺路石样排列，接种后48-72小时可见细胞集落形成
常见问题优化
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
大鼠去甲肾上腺素(NE)elisa试剂盒 | SNU423人肝癌细胞 |
大鼠N-myc下游调节基因2(NDRG2)elisa试剂盒 | 兔肾上腺髓质细胞 |
大鼠中性粒细胞CD64(nCD64)elisa试剂盒 | 兔肝实质细胞 |
大鼠N钙粘着蛋白;上皮性钙黏附蛋白(N-Cad)elisa试剂盒 | 兔腹腔主动脉外膜成纤维细胞 |
大鼠骨钙素(BGP;OCN)elisa试剂盒 | 兔肺巨噬细胞 |
大鼠骨骼肌慢肌肌钙蛋白I(TNNI1)elisa试剂盒 | 兔皮下微内皮细胞 |
小鼠转化生长因子β受体2（TGFBR2）elisa试剂盒 | 兔腹膜间皮细胞 |
MPC-5小鼠肾足细胞专用培养基 | FANCC基因过表达细胞株 |
SW48人结肠腺癌细胞专用培养基 | CYP26C1基因过表达细胞株 |
大鼠原代前列腺上皮细胞专用培养基 | GPR17基因过表达细胞株 |
AN3CA细胞专用培养基 | TP63基因过表达细胞株 |
人原代角膜基质细胞专用培养基 | CASP5基因过表达细胞株 |
兔输卵管上皮细胞TOV-112D细胞专用培养基 | HCAR2基因过表达细胞株 |
AT-3细胞专用培养基 | PCDHB3基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷D-Hanks液、胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液、K-SFM培养基 + EGF + BSA、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取输卵管组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅳ消化液，37℃水浴消化27min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用K-SFM培养基 + EGF + BSA重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2天换液一次，定期倒置显微镜观察多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接及生长情况。
