产品名称 | 兔肾小球上皮细胞 | 组织来源 | 肾组织 |
英文名称 | Rabbit Glomerular Epithelial Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3786 |
方法简介 实验室分离的兔肾小球上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔肾小球上皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔肾小球上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔肾小球上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：3-4月龄日本大耳兔，体重2.5-3.0kg，单只取材获1.2-2.8×10⁶个细胞，活率>90%
试剂：弹性蛋白酶、胰蛋白酶、EDTA、无钙镁PBS、DMEM/F12完全培养基
分离纯化步骤
取材组织经D-Hanks液冲洗后，手工剔除杂质，剪成1-2mm³小块，加入弹性蛋白酶、胰蛋白酶、EDTA、无钙镁PBS37℃消化45-60分钟
消化产物经100目滤网过滤，PBS洗涤1次，400g离心10分钟收集细胞沉淀
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
调整细胞密度至3×10⁴接种于预处理培养皿，37℃、5% CO₂培养箱培养
上皮样细胞贴壁牢固，换液时动作轻柔避免冲刷掉贴壁细胞
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠1型Nel样分子(NELL1)elisa试剂盒 | HepAD38人肝癌细胞 |
大鼠中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)elisa试剂盒 | 兔肾集合管上皮细胞 |
大鼠N-myc下游调节基因2(NDRG2)elisa试剂盒 | 兔食管平滑肌细胞 |
大鼠神经细胞粘附分子配体1(NCAM-L1;CD171)elisa试剂盒 | 兔肺微周细胞 |
大鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)elisa试剂盒 | 小鼠胚胎成纤维细胞 |
大鼠骨钙素(BGP;OCN)elisa试剂盒 | 兔皮肤成纤维细胞 |
小鼠转化受体电位阳离子通道亚家族A成员1（TRPA1）elisa试剂盒 | 兔成纤维细胞 |
MPC-5小鼠肾足细胞专用培养基 | EVX1基因过表达细胞株 |
SW48人结肠腺癌细胞专用培养基 | GNAT1基因过表达细胞株 |
兔原代脊髓微血管内皮细胞专用培养基 | CES5A基因过表达细胞株 |
AMO-1细胞专用培养基 | PDZD4基因过表达细胞株 |
人原代角膜内皮细胞专用培养基 | GLRA3基因过表达细胞株 |
兔肾小球上皮细胞Toledo细胞专用培养基 | RGS9基因过表达细胞株 |
ASPC-1/GEM细胞专用培养基 | CHRND基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷D-Hanks液、Ⅳ型胶原酶+胶原酶Ⅱ混合消化液、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取肾组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入Ⅳ型胶原酶消化液，37℃水浴消化39min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每3天换液一次，定期倒置显微镜观察圆形或椭圆形，贴壁生长，胞质丰富及生长情况。
