产品名称 | 兔肠系膜平滑肌细胞 | 组织来源 | 肠系膜组织 |
英文名称 | Rabbit Mesenteric Smooth Muscle Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3780 |
方法简介 实验室分离的兔肠系膜平滑肌细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔肠系膜平滑肌细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔肠系膜平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 平滑肌样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔肠系膜平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2-3月龄新西兰大白兔，体重2.0-2.5kg，每只可获得1.5-3.0×10⁶个细胞，活力>88%
试剂：弹性蛋白酶、胰蛋白酶、EDTA、无钙镁PBS、RPMI-1640培养基
分离纯化步骤
组织取材后迅速放入预冷PBS中转运，无菌操作下剔除周围组织，剪碎后加入弹性蛋白酶、胰蛋白酶、EDTA、无钙镁PBS于37℃消化30-50分钟
细胞悬液依次过100目、200目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
平滑肌细胞增殖速度中等，传代后24小时贴壁，第4-6天可传代
常见问题优化
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
大鼠中性粒细胞胞外诱捕网络(NETs)elisa试剂盒 | Huh7.5.1 (STR)人肝癌细胞 |
大鼠新饱食分子蛋白1(Nesfatin-1)elisa试剂盒 | 小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞 |
大鼠中性内肽酶;脑啡肽酶(NEP)elisa试剂盒 | 小鼠DRG神经元细胞 |
大鼠去甲肾上腺素(NE)elisa试剂盒 | 小鼠肌腱细胞 |
大鼠骨成型蛋白15(BMP-15)elisa试剂盒 | 小鼠毛囊细胞 |
大鼠骨成型蛋白3(BMP-3)elisa试剂盒 | 兔胆囊上皮细胞 |
小鼠转甲状腺素蛋白（TTR）elisa试剂盒 | 小鼠海马神经干细胞 |
MLE-12小鼠肺上皮细胞专用培养基 | CPNE4基因过表达细胞株 |
SW-13人肾上腺皮质小癌细胞专用培养基 | FAM227B基因过表达细胞株 |
兔原代膀胱间质细胞专用培养基 | CDH7基因过表达细胞株 |
AIM-V细胞培养基 | LRCH1基因过表达细胞株 |
人原代结肠平滑肌细胞专用培养基 | CYP4F22基因过表达细胞株 |
兔肠系膜平滑肌细胞THP-1细胞专用培养基 | FZD3基因过表达细胞株 |
Ana-1细胞专用培养基 | FANCC基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（EDTA、胰蛋白酶）、Ⅳ型胶原酶、DMEM + 10% FBS + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出肠组织。
2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入EDTA+胰蛋白酶混合消化液，37℃消化46min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-210000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察梭形或纺锤形，贴壁生长，呈峰窝状排列及生长状态。
