产品名称 | 兔睾丸间质细胞 | 组织来源 | 睾丸组织 |
英文名称 | Rabbit Leydig Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3775 |
方法简介 实验室分离的兔睾丸间质细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔睾丸间质细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔睾丸间质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔睾丸间质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：3-4月龄日本大耳兔，体重2.5-3.0kg，单只取材获1.2-2.8×10⁶个细胞，活率>90%
试剂：胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液、RPMI-1640培养基
分离纯化步骤
取目标组织用无钙镁PBS洗涤3次，剔除脂肪和结缔组织后剪成小碎片，加入胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液消化45-90分钟
细胞悬液依次过100目、200目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
细胞在体外培养条件下生长稳定，形态保持一致性，连续培养3-5代后仍保持原有表型特征
常见问题优化
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
大鼠核转录因子(NF-KB)elisa试剂盒 | LTEP-α-2人肺腺癌细胞 |
大鼠神经丝蛋白200(NF200)elisa试剂盒 | 小鼠骨髓基质干细胞 |
大鼠神经加压素(Neurotensin)elisa试剂盒 | 小鼠睾丸间质细胞 |
大鼠巢蛋白(Nestin)elisa试剂盒 | 小鼠膀胱间质细胞 |
大鼠谷氧还蛋白(GLRX)elisa试剂盒 | 小鼠肾足细胞 |
大鼠谷氧还蛋白2(GLRX2，grx2)elisa试剂盒 | 小鼠舌表皮细胞 |
小鼠转录因子myrf（myrf）elisa试剂盒 | 小鼠骨细胞 |
MEF(丝裂霉素C处理)小鼠胚胎成纤维细胞专用培养基 | PAK5基因过表达细胞株 |
sv-huc-1人膀胱上皮永生化细胞专用培养基 | CES5A基因过表达细胞株 |
兔原代小肠粘膜上皮细胞专用培养基 | CCM2L基因过表达细胞株 |
AAV-293细胞专用培养基 | ACTR8基因过表达细胞株 |
人原代结直肠癌相关成纤维细胞专用培养基 | RGS9基因过表达细胞株 |
兔睾丸间质细胞TE-1 细胞专用培养基 | F12基因过表达细胞株 |
alphaTC1clone6细胞专用培养基 | GAPDHS基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶）、胰蛋白酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出睾丸组织。
2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液，37℃消化33min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-230000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察长梭形或纺锤形，贴壁生长，呈旋涡状排列及生长状态。
