产品名称 | 兔骨细胞 | 组织来源 | 骨组织 |
英文名称 | Rabbit Osteocytes | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3765 |
方法简介 实验室分离的兔骨细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔骨细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 多边形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：3-4月龄日本大耳兔，体重2.5-3.0kg，单只取材获1.2-2.8×10⁶个细胞，活率>90%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA、DMEM/F12完全培养基
分离纯化步骤
取材组织经D-Hanks液冲洗后，手工剔除杂质，剪成1-2mm³小块，加入0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA37℃消化120-180分钟
消化产物经70目滤网过滤，PBS洗涤1次，500g离心12分钟收集细胞沉淀
细胞沉淀重悬于含10% FBS的培养基中，经Ficoll密度梯度离心（500g，12分钟）纯化目标细胞
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按2×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
细胞贴壁生长，形态均匀，24-48小时内可见明显贴壁现象，第3-5天可达80-90%融合
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
大鼠神经损伤诱导蛋白1(NINJ1)elisa试剂盒 | HULEC-5a人肺微血管内皮细胞 |
大鼠钠氢交换因子1(NHE1)elisa试剂盒 | 小鼠肠间质细胞 |
大鼠Nogo66受体同源物1(NGRH1)elisa试剂盒 | 小鼠主动脉内皮细胞 |
大鼠脑红蛋白(NGB)elisa试剂盒 | 大鼠牙龈上皮细胞 |
大鼠谷氨酰胺转胺酶1(TGM1)elisa试剂盒 | 大鼠结膜成纤维细胞 |
大鼠谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)elisa试剂盒 | 小鼠乳腺成纤维细胞 |
小鼠自噬相关蛋白7（ATG7）elisa试剂盒 | 小鼠股动脉内皮细胞 |
MC3T3-E1小鼠胚胎成骨细胞专用培养基 | ANKRD65基因过表达细胞株 |
SNU-398人胃癌细胞专用培养基 | THNSL1基因过表达细胞株 |
兔原代椎体终板软骨干细胞专用培养基 | F13A1基因过表达细胞株 |
A549/DDP细胞专用培养基 | CCDC71基因过表达细胞株 |
人原代类风湿关节炎滑膜成纤维细胞专用培养基 | ADRA1D基因过表达细胞株 |
兔骨细胞T24细胞专用培养基 | SPIRE2基因过表达细胞株 |
AC16细胞专用培养基 | PAK5基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（Ⅰ型胶原酶、胶原酶Ⅱ）、透明质酸酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出骨骼组织。
2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入Ⅰ型胶原酶+胶原酶Ⅱ混合消化液，37℃消化34min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-240000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察形态因细胞类型而异，贴壁或悬浮生长及生长状态。
