产品名称 | 兔外周血单核细胞 | 组织来源 | 外周血组织 |
英文名称 | Rabbit Peripheral Blood Monocytes | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3754 |
方法简介 实验室分离的兔外周血单核细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔外周血单核细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔外周血单核细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 圆形
传代比例： -
传代特性： 不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔外周血单核细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：3-4月龄日本大耳兔，体重2.5-3.0kg，单只取材获1.2-2.8×10⁶个细胞，活率>90%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA、RPMI-1640培养基
分离纯化步骤
脾脏取出后置于预冷PBS中，用注射器针筒研磨过滤，300g离心10分钟收集细胞
细胞悬液经200目滤网过滤去除组织碎片，400g离心10分钟收集细胞沉淀，PBS洗涤1次
细胞沉淀重悬于含10% FBS的培养基中，经Ficoll密度梯度离心进一步纯化目标细胞
原代培养要点
细胞悬浮于完全培养基中，按1-5×10⁵ cells/mL密度接种于24孔板，37℃、5% CO₂培养箱悬浮培养
免疫细胞体外存活期有限，建议实验在取材后7-14天内完成，期间定期检测细胞活力
常见问题优化
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要细胞因子，确保CO₂浓度和温度稳定
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
目标细胞占比低：优化Ficoll梯度离心条件，改进密度梯度分离策略
大鼠纳豆激酶(NK)elisa试剂盒 | PGBE1人肺巨细胞 |
大鼠神经损伤诱导蛋白2(NINJ2)elisa试剂盒 | 小鼠肺动脉内皮细胞 |
大鼠烟酰胺(Nicotinamide)elisa试剂盒 | 大鼠脊髓星形胶质细胞 |
大鼠血氨(NH3)elisa试剂盒 | 大鼠股骨头微内皮细胞 |
大鼠谷氨酰胺(Gln)elisa试剂盒 | 大鼠毛囊干细胞 |
大鼠谷氨酰胺酶(GLS)elisa试剂盒 | 小鼠肝窦内皮细胞 |
小鼠总胆红素（TB）elisa试剂盒 | 大鼠视网膜色上皮细胞 |
MC38小鼠结肠癌细胞专用培养基 | FBXL20基因过表达细胞株 |
Snu-182人肝癌细胞专用培养基 | CCM2L基因过表达细胞株 |
人原代肝外胆管上皮细胞专用培养基 | BMPER基因过表达细胞株 |
A3细胞专用培养基 | ZNF546基因过表达细胞株 |
人原代淋巴结成纤维细胞专用培养基 | F12基因过表达细胞株 |
兔外周血单核细胞SW948细胞专用培养基 | CPNE4基因过表达细胞株 |
A673细胞专用培养基 | PPP1R21基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶、胰蛋白酶）、RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME、双抗。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取外周血组织。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的目标组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化47min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经200μm滤网过滤，采用Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞，去除未消化组织块。
2. 用RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME调整细胞浓度至120000.0cells/mL，接种于预涂未涂层的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2天更换新鲜培养基，倒置显微镜下观察细胞贴壁及悬浮或半贴壁生长，圆形或椭圆形，折光性强。
