产品名称 | 兔微血管周细胞 | 组织来源 | 微血管组织 |
英文名称 | Rabbit Microvascular Pericytes | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3751 |
方法简介 实验室分离的兔微血管周细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔微血管周细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔微血管周细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 周细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔微血管周细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2.5-3.5月龄白色家兔，体重2.2-2.8kg，每只可分离1.8-3.2×10⁶个目标细胞，活力>89%
试剂：弹性蛋白酶、胰蛋白酶、EDTA、无钙镁PBS、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
取材组织经D-Hanks液冲洗后，手工剔除杂质，剪成1-2mm³小块，加入弹性蛋白酶、胰蛋白酶、EDTA、无钙镁PBS37℃消化30-60分钟
消化液经100目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、400g离心10分钟收集细胞沉淀
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
细胞生长速率适中，每5-7天传代一次，传代后活力保持良好
常见问题优化
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠钠钾氯协同转运蛋白1(NKCC1)elisa试剂盒 | calu-1-luc-EGFP人肺癌细胞 |
大鼠纳豆激酶(NK)elisa试剂盒 | 大鼠室管膜细胞 |
大鼠甲状腺钠碘转运体(NIS)elisa试剂盒 | 大鼠肌腱成纤维细胞 |
大鼠烟酰胺(Nicotinamide)elisa试剂盒 | 大鼠卵泡膜细胞 |
大鼠谷氨酸脱羧酶67(GAD67)elisa试剂盒 | 大鼠海绵体平滑肌细胞 |
大鼠谷氨酸转运体1(GLT-1)elisa试剂盒 | 小鼠心房心肌细胞 |
小鼠总甲状腺激素（TT4）elisa试剂盒 | 大鼠椎体终板软骨干细胞 |
MB49小鼠膀胱癌细胞专用培养基 | B3GLCT基因过表达细胞株 |
SNB-19人脑胶质瘤细胞专用培养基 | PDZD4基因过表达细胞株 |
人原代输尿管平滑肌细胞专用培养基 | ACTR8基因过表达细胞株 |
A2780细胞专用培养基 | ADCK1基因过表达细胞株 |
人原代卵巢囊肿细胞专用培养基 | BTBD16基因过表达细胞株 |
兔微血管周细胞SW756细胞专用培养基 | ZNF749基因过表达细胞株 |
A549+luc细胞专用培养基 | ANKRD65基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶、胰蛋白酶）、DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗、双抗。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取目标。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的目标组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化47min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，1次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用Percoll密度梯度离心纯化内皮细胞，去除未消化组织块。
2. 用DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗调整细胞浓度至120000.0cells/mL，接种于预涂胶原的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2-3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及鹅卵石样铺路石状排列，贴壁生长，细胞边界清晰。
