产品名称 | 兔胰岛β细胞 | 组织来源 | 胰腺组织 |
英文名称 | Rabbit Pancreatic Beta Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3745 |
方法简介 实验室分离的兔胰岛β细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔胰岛β细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔胰岛β细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔胰岛β细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2-3月龄新西兰大白兔，体重2.0-2.5kg，每只可获得1.5-3.0×10⁶个细胞，活力>88%
试剂：胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
取材组织经PBS清洗去除血液和杂质，剪碎至1mm³大小，加入胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液于37℃振荡消化30-60分钟
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
采用预混合抗体标记+磁珠分选策略，特异性富集目标细胞，纯度>88%
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
原代细胞贴壁生长，形态典型，接种后48小时开始增殖，第5-7天可达到亚融合状态
常见问题优化
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
大鼠N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位NR1(NMDANR1)elisa试剂盒 | A549/OVA人肺癌细胞 |
大鼠含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)elisa试剂盒 | 大鼠皮肤成纤维细胞 |
大鼠含NLR家族Pyrin域蛋白2(NLRP2)elisa试剂盒 | 大鼠垂体细胞 |
大鼠NOD样受体家族蛋白3(NLPR3)elisa试剂盒 | 大鼠肠神经胶质细胞 |
大鼠谷氨酸受体1(GluR1)elisa试剂盒 | 大鼠粘膜上皮细胞 |
大鼠谷氨酸受体3(GluR3)elisa试剂盒 | 大鼠下丘脑神经元细胞 |
小鼠组胺-N-甲基转移酶（HNMT）elisa试剂盒 | 大鼠成纤维细胞 |
L Wnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞专用培养基 | TRPV3基因过表达细胞株 |
SK-OV-3+LUC人卵巢癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | F13A1基因过表达细胞株 |
大鼠原代骨骼肌细胞专用培养基 | ADGRG3基因过表达细胞株 |
A20细胞专用培养基 | PCDHB3基因过表达细胞株 |
人原代毛囊成纤维细胞专用培养基 | SPIRE2基因过表达细胞株 |
兔胰岛β细胞SW620/5FU细胞专用培养基 | SLC26A4基因过表达细胞株 |
A-427细胞专用培养基 | FBXL20基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶、胰蛋白酶）、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、双抗。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取内分泌细胞。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的内分泌细胞组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化38min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。
2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗调整细胞浓度至130000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2-3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及圆形或椭圆形，贴壁或悬浮生长，胞质颗粒丰富。
