兔结肠黏膜上皮细胞

兔结肠黏膜上皮细胞

采用胰蛋白酶-EDTA联合消化法从新西兰大白兔的结肠黏膜组织中分离获取上皮细胞，经0.25%胰蛋白酶-EDTA传代后，采用含血清的基础培养基维持培养；通过空间转录组学检测MUC1表达，结合单细胞RNA测序(scRNA-seq)分析PAX8蛋白水平，并采用线粒体膜电位检测进一步验证细胞生物学特性。

产品名称：兔结肠黏膜上皮细胞

英文名称： Rabbit Colonic Mucosal Epithelial Cells

组织来源： 结肠组织

默认种属 ：兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔结肠黏膜上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔结肠黏膜上皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔结肠黏膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔结肠黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。

2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（EDTA、胰蛋白酶）、Ⅳ型胶原酶、K-SFM培养基 + EGF + BSA（37℃预热）、双抗溶液。

3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。

二、取材与预处理

1. 空气栓塞法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出肠组织。

2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。

3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块加入EDTA+胰蛋白酶混合消化液，37℃消化47min，间断吹打。

2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。

3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。

2. 沉淀细胞用K-SFM培养基 + EGF + BSA重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-220000.0cells/cm²密度接种。

3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2天换液一次，镜检观察多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接及生长状态。

动物取材须在无菌条件下进行，结肠组织获取后迅速转入含抗生素的Hanks液中转运，组织离体时间超过1小时将严重影响肠黏膜上皮的分离效率和活力。

培养板需提前用0.01%多聚赖氨酸包被2小时，使用前PBS洗涤3次，未处理的培养表面会导致肠黏膜上皮贴壁不良和形态异常。

该细胞为贴壁生长型，体外可传代10-15次，建议每2天换液一次，传代比例控制在1:2以内以维持细胞正常形态和功能。

培养基中需添加K-SFM无血清培养基补充EGF和BSA，其中血清浓度应根据细胞生长状态适当调整，低血清条件有助于减少杂细胞污染但可能影响肠黏膜上皮增殖速度。

换液操作全程注意无菌操作，使用经0.22μm滤膜过滤的新鲜培养基，加入后轻摇培养皿使培养基均匀分布，避免产生气泡影响细胞生长。