产品名称 | 兔精原干细胞 | 组织来源 | 睾丸组织 |
英文名称 | Rabbit Spermatogonial Stem Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3724 |
方法简介 实验室分离的兔精原干细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔精原干细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔精原干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 圆形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔精原干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2-3月龄新西兰大白兔，体重2.0-2.5kg，每只可获得1.5-3.0×10⁶个细胞，活力>88%
试剂：中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS、DMEM/F12完全培养基
分离纯化步骤
组织取材后迅速放入预冷PBS中转运，无菌操作下剔除周围组织，剪碎后加入中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS于37℃消化30-60分钟
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
干细胞增殖较慢，接种后3-5天可见小集落形成，7-10天可达到传代密度
常见问题优化
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
大鼠Noggin(NOG)elisa试剂盒 | A549+GFP+LUC人非小细胞 |
大鼠一氧化氮(NO)elisa试剂盒 | 人根尖牙乳头干细胞 |
大鼠烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶1(NMNAT1)elisa试剂盒 | 人真皮微内皮细胞 |
大鼠去甲变肾上腺素(NMN)elisa试剂盒 | 人真皮毛乳头细胞 |
大鼠高迁移率族蛋白1(HMG-1)elisa试剂盒 | 人乳腺相关成纤维细胞 |
大鼠高铁血红蛋白(MHB)elisa试剂盒 | 大鼠颈内皮细胞 |
小鼠组蛋白乙酰基转移酶1（HAT1）elisa试剂盒 | 人淋巴管成纤维细胞 |
T24人膀胱移行癌细胞专用培养基 | CFAP210基因过表达细胞株 |
SK-N-MC人神经上皮瘤细胞专用培养基 | ADGRG3基因过表达细胞株 |
小鼠原代前脂肪细胞专用培养基 | ACSBG1基因过表达细胞株 |
5637细胞专用培养基 | CCR4基因过表达细胞株 |
人原代脑血管周细胞专用培养基 | SLC26A4基因过表达细胞株 |
兔精原干细胞SW-1353细胞专用培养基 | GPR85基因过表达细胞株 |
A172细胞专用培养基 | PTPN22基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ+透明质酸酶）、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、双抗。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取干细胞。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的干细胞组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化38min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，1次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。
2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗调整细胞浓度至130000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2-3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及圆形或椭圆形，贴壁生长，细胞核大，核仁明显。
