产品名称 | 兔神经干细胞 | 组织来源 | 神经组织 |
英文名称 | Rabbit Neural Stem Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3711 |
方法简介 实验室分离的兔神经干细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔神经干细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔神经干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 未分化
传代比例： 1:2
传代特性： 可传10代以上
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔神经干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2.5-3.5月龄白色家兔，体重2.2-2.8kg，每只可分离1.8-3.2×10⁶个目标细胞，活力>89%
试剂：中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS、MEM培养基
分离纯化步骤
取材组织经PBS清洗去除血液和杂质，剪碎至1mm³大小，加入中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS于37℃振荡消化30-60分钟
细胞悬液依次过100目、200目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
细胞沉淀重悬于含10% FBS的培养基中，经Ficoll密度梯度离心（400g，10分钟）纯化目标细胞
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
干细胞维持需添加特定生长因子维持未分化状态，注意定期检测标志物表达
常见问题优化
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
大鼠Notch配体(NotchL)elisa试剂盒 | A375-LUC-EGFP人恶性黑色素瘤细胞 |
大鼠Notch同源物2(NOTCH2)elisa试剂盒 | 人子宫内膜成纤维细胞 |
大鼠跨膜受体蛋白Notch1(NOTCH1)elisa试剂盒 | 人肾上腺皮质细胞 |
大鼠氧化亚氮还原酶(NOS)elisa试剂盒 | 人上皮细胞 |
大鼠干细胞因子受体(SCFR)elisa试剂盒 | 人肝窦内皮细胞 |
大鼠高尔基体膜蛋白(GOLIM4)elisa试剂盒 | 人脾星状细胞 |
小鼠组织因子途径抑制物2（TFPI2）elisa试剂盒 | 人扁桃体成纤维细胞 |
SW620/5FU人结直肠癌氟尿嘧啶耐药株细胞专用培养基 | ZNF99基因过表达细胞株 |
SK-MEL-28人皮肤黑色素瘤细胞专用培养基 | RGS9基因过表达细胞株 |
大鼠原代真皮毛乳头细胞专用培养基 | F12基因过表达细胞株 |
3AO细胞专用培养基 | ZNF749基因过表达细胞株 |
人原代皮肤成纤维细胞专用培养基 | FAM53A基因过表达细胞株 |
兔神经干细胞SUP-T1细胞专用培养基 | ESS2基因过表达细胞株 |
769-P细胞专用培养基 | EPS8L3基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷D-Hanks液、Ⅳ型胶原酶+胰蛋白酶混合消化液、α-MEM + 10% FBS + 1% 双抗、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取脑组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入Ⅳ型胶原酶消化液，37℃水浴消化39min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用Percoll密度梯度离心富集干细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用α-MEM + 10% FBS + 1% 双抗重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2天换液一次，定期倒置显微镜观察梭形或多角形，贴壁生长，核质比高，核仁明显及生长情况。
