产品名称 | 兔胸腺淋巴细胞 | 组织来源 | 胸腺组织 |
英文名称 | Rabbit Thymic Lymphocytes | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3708 |
方法简介 实验室分离的兔胸腺淋巴细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔胸腺淋巴细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔胸腺淋巴细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 圆形
传代比例： -
传代特性： 不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔胸腺淋巴细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2.5-3.5月龄白色家兔，体重2.2-2.8kg，每只可分离1.8-3.2×10⁶个目标细胞，活力>89%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA、RPMI-1640培养基
分离纯化步骤
采集抗凝全血，用PBS稀释后缓慢铺于Ficoll分离液上层，800g离心20分钟（刹车关），吸取中间白膜层
细胞悬液经200目滤网过滤去除组织碎片，400g离心10分钟收集细胞沉淀，PBS洗涤1次
采用双抗体夹心法结合磁珠分选技术富集目标细胞亚群，纯度可达92%以上
原代培养要点
细胞重悬于含相应细胞因子的完全培养基中，按适当密度接种于低吸附培养皿，37℃、5% CO₂培养
悬浮细胞需注意维持适当的细胞密度，密度过低会影响存活和增殖
常见问题优化
细胞活力差：操作全程保持低温，使用新鲜配制试剂，离心力不宜过高
目标细胞占比低：优化Ficoll梯度离心条件，改进密度梯度分离策略
细胞活化状态改变：缩短体外培养时间，避免过度刺激导致细胞表型改变
大鼠Notch受体(NotchR)elisa试剂盒 | A375+EGFP人恶性黑色素瘤细胞 |
大鼠跨膜受体蛋白Notch3(NOTCH3)elisa试剂盒 | 人宫颈上皮细胞 |
大鼠跨膜受体蛋白Notch2(NOTCH2)elisa试剂盒 | 人输尿管平滑肌细胞 |
大鼠一氧化氮合成酶2(NOS2)elisa试剂盒 | 人直肠成纤维细胞 |
大鼠干细胞生长因子受体(Kit；CD117)elisa试剂盒 | 人胃黏膜上皮细胞 |
大鼠高半胱氨酸(Hcy)elisa试剂盒 | 芽成纤维细胞 |
血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本serum, plasma, tissue homogenates and other biological fluids(serum - plasma - tissue homogenates - other biological fluids)elisa试剂盒 | 人甲状腺上皮细胞 |
SW620+GFP人结直肠腺癌+GFP细胞专用培养基 | DHDH基因过表达细胞株 |
SK-MEL-2+LUC人皮肤黑色素瘤荧光素酶标记细胞专用培养基 | ZNF546基因过表达细胞株 |
人原代肾间质成纤维细胞专用培养基 | GPR22基因过表达细胞株 |
2BS细胞专用培养基 | APOBEC3F基因过表达细胞株 |
人原代皮脂腺癌细胞专用培养基 | GPCPD1基因过表达细胞株 |
兔胸腺淋巴细胞SUP-B15细胞专用培养基 | AIRE基因过表达细胞株 |
5-8F细胞专用培养基 | CFAP210基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶、胰蛋白酶）、RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME、双抗。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取外周血组织。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的目标组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化35min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，1次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经200μm滤网过滤，采用Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞，去除未消化组织块。
2. 用RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME调整细胞浓度至100000.0cells/mL，接种于预涂未涂层的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2天更换新鲜培养基，倒置显微镜下观察细胞贴壁及悬浮或半贴壁生长，圆形或椭圆形，折光性强。
