产品名称 | 兔胰岛细胞 | 组织来源 | 胰腺组织 |
英文名称 | Rabbit Pancreatic Islet Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3701 |
方法简介 实验室分离的兔胰岛细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔胰岛细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔胰岛细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔胰岛细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2.5-3.5月龄白色家兔，体重2.2-2.8kg，每只可分离1.8-3.2×10⁶个目标细胞，活力>89%
试剂：胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
组织块经Hanks液反复冲洗后剪碎，加入胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液于37℃水浴消化30-60分钟，期间间歇振荡
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
采用预混合抗体标记+磁珠分选策略，特异性富集目标细胞，纯度>88%
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
原代细胞贴壁生长，形态典型，接种后48小时开始增殖，第5-7天可达到亚融合状态
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
大鼠硝酸还原酶(NR)elisa试剂盒 | KMS-12-PE人多发性骨髓瘤细胞 |
大鼠醌氧化还原酶(NQO)elisa试剂盒 | 人肾上腺包膜成纤维细胞 |
大鼠神经肽Y-Y1受体(NPY-Y1R)elisa试剂盒 | 人肝成纤维细胞 |
大鼠利钠肽受体α(NPR-α)elisa试剂盒 | 人内皮细胞 |
大鼠肝脂肪酸结合蛋白(L-FABP)elisa试剂盒 | 人气管平滑肌细胞 |
大鼠干扰素α4(IFN-α4)elisa试剂盒 | 人前脂肪细胞 |
猪3-磷酸甘油酸脱氢酶（PHGDH）elisa试剂盒 | 人肝相关成纤维细胞 |
SW620+luc人结直肠腺癌+luc细胞专用培养基 | DRD5基因过表达细胞株 |
SK-MEL-2人皮肤黑色素瘤细胞专用培养基 | SLC15A2基因过表达细胞株 |
大鼠原代雪旺细胞专用培养基 | BTBD16基因过表达细胞株 |
293FT细胞专用培养基 | CASQ2基因过表达细胞株 |
人原代脾成纤维细胞专用培养基 | FBXL20基因过表达细胞株 |
兔胰岛细胞SUM149PT细胞专用培养基 | PTPN22基因过表达细胞株 |
4T1+luc 细胞专用培养基 | CYLC2基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶）、胰蛋白酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出内分泌细胞组织。
2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液，37℃消化44min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-240000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察圆形或椭圆形，贴壁或悬浮生长，胞质颗粒丰富及生长状态。
