产品名称 | 兔脑膜细胞 | 组织来源 | 脑膜组织 |
英文名称 | Rabbit Meningeal Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3663 |
方法简介 实验室分离的兔脑膜细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔脑膜细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔脑膜细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔脑膜细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2.5-3.5月龄白色家兔，体重2.2-2.8kg，每只可分离1.8-3.2×10⁶个目标细胞，活力>89%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA、RPMI-1640培养基
分离纯化步骤
组织块经Hanks液反复冲洗后剪碎，加入0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA于37℃水浴消化15-30分钟，期间间歇振荡
滤过70目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，300g离心8分钟
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按2×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
原代细胞贴壁生长，形态典型，接种后48小时开始增殖，第5-7天可达到亚融合状态
常见问题优化
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
大鼠Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)elisa试剂盒 | TK6人成淋巴细胞 |
大鼠硝基还原酶(NTR)elisa试剂盒 | 兔肌腱成纤维细胞 |
大鼠N端前脑钠素(NT-proBNP)elisa试剂盒 | 兔卵巢颗粒细胞 |
大鼠轴突生长诱向因子3(Ntn3)elisa试剂盒 | 兔膀胱平滑肌细胞 |
大鼠钙粘蛋白1(Cad1)elisa试剂盒 | 兔肝卵圆细胞 |
大鼠甘氨酸转运蛋白1(GLYT1)elisa试剂盒 | 兔嗅球神经干细胞 |
猪CD36分子（CD36）elisa试剂盒 | 兔子宫内膜间质细胞 |
SW-13人肾上腺皮质小癌细胞专用培养基 | RFX3基因过表达细胞株 |
sh-sy5y转染野生型人神经母瘤细胞专用培养基 | GAPDHS基因过表达细胞株 |
大鼠原代韧带成纤维细胞专用培养基 | PPP1R21基因过表达细胞株 |
大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞专用培养基 | TRPV3基因过表达细胞株 |
人原代前列腺成纤维细胞专用培养基 | EPS8L3基因过表达细胞株 |
兔脑膜细胞SNU-638细胞专用培养基 | CDC5L基因过表达细胞株 |
小鼠原代肝窦内皮细胞专用培养基 | APOBEC4基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷D-Hanks液、胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液、Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取目标组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅳ消化液，37℃水浴消化39min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每3天换液一次，定期倒置显微镜观察多突起状，贴壁生长，可见神经突延伸及生长情况。
