产品名称 | 兔腮腺细胞 | 组织来源 | 腮腺组织 |
英文名称 | Rabbit Parotid Gland Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3656 |
方法简介 实验室分离的兔腮腺细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔腮腺细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔腮腺细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔腮腺细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：3-4月龄日本大耳兔，体重2.5-3.0kg，单只取材获1.2-2.8×10⁶个细胞，活率>90%
试剂：中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS、DMEM/F12完全培养基
分离纯化步骤
组织取材后迅速放入预冷PBS中转运，无菌操作下剔除周围组织，剪碎后加入中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS于37℃消化30-60分钟
细胞悬液依次过100目、200目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
调整细胞密度至3×10⁴接种于预处理培养皿，37℃、5% CO₂培养箱培养
细胞贴壁后呈典型形态，生长速率适中，每3-5天传代一次，传代后活力保持良好
常见问题优化
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠Ⅰ型胶原交联氨基端肽(NTX-Ⅰ)elisa试剂盒 | SAOS-2-LUC人成骨肉瘤细胞 |
大鼠神经营养素受体1(NTR1)elisa试剂盒 | 兔破骨细胞 |
大鼠N末端C型利钠肽前体(NT-proCNP)elisa试剂盒 | 兔胰岛细胞 |
大鼠轴突生长诱向因子4(Ntn4)elisa试剂盒 | 兔肠微内皮细胞 |
大鼠钙卫蛋白(CALP)elisa试剂盒 | 兔小肠成纤维细胞 |
大鼠钙粘蛋白2(Cad2)elisa试剂盒 | 兔少突胶质细胞 |
猪CD3分子（CD3）elisa试剂盒 | 兔腮腺细胞 |
SW1116人结肠腺癌细胞专用培养基 | FNDC7基因过表达细胞株 |
sh-sy5y转染突变型人神经母瘤细胞专用培养基 | DPEP3基因过表达细胞株 |
小鼠原代输尿管平滑肌细胞专用培养基 | BLNK基因过表达细胞株 |
小鼠原代主动脉内皮细胞专用培养基 | ESS2基因过表达细胞株 |
人原代前列腺上皮细胞专用培养基 | CFAP210基因过表达细胞株 |
兔腮腺细胞SNU601细胞专用培养基 | GRAMD1C基因过表达细胞株 |
羊原代髓核细胞专用培养基 | CRHR2基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷D-Hanks液、胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液、K-SFM培养基 + EGF + BSA、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取目标组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅳ消化液，37℃水浴消化27min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用K-SFM培养基 + EGF + BSA重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2天换液一次，定期倒置显微镜观察多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接及生长情况。
