产品名称 | 兔肠平滑肌细胞 | 组织来源 | 肠组织 |
英文名称 | Rabbit Intestinal Smooth Muscle Cells | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3648 |
方法简介 实验室分离的兔肠平滑肌细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔肠平滑肌细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔肠平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 平滑肌样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-10代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔肠平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2.5-3.5月龄白色家兔，体重2.2-2.8kg，每只可分离1.8-3.2×10⁶个目标细胞，活力>89%
试剂：胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
取材组织经D-Hanks液冲洗后，手工剔除杂质，剪成1-2mm³小块，加入胶原酶Type I、Dispase II、胰蛋白酶、Hanks平衡盐溶液37℃消化30-50分钟
消化液经100目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、400g离心10分钟收集细胞沉淀
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
细胞贴壁后呈典型的梭形，胞质内可见肌丝排列，5-7天可达到高融合度
常见问题优化
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
大鼠有机阴离子转运多肽(OATP1B2)elisa试剂盒 | CNE-2Z人鼻咽癌细胞 |
大鼠有机阴离子转运蛋白3(OAT-3)elisa试剂盒 | 兔腹膜间皮细胞 |
大鼠有机阴离子转运体2(OAT2)elisa试剂盒 | 兔颈动脉内皮细胞 |
大鼠核连蛋白2(NUCB2)elisa试剂盒 | 小鼠视网膜神经节细胞 |
大鼠钙调素依赖蛋白激酶II(CAMK II)elisa试剂盒 | 小鼠牙周膜成纤维细胞 |
大鼠钙调素依赖蛋白激酶IIα(CAMK IIα)elisa试剂盒 | 兔睾丸间质细胞 |
猪CYP8b1（CYP8b1）elisa试剂盒 | 兔微内皮细胞 |
sv-huc-1人膀胱上皮永生化细胞专用培养基 | FAM110B基因过表达细胞株 |
SHP-77人小肺癌细胞专用培养基 | APOBEC3F基因过表达细胞株 |
羊原代卵巢颗粒细胞专用培养基 | HOOK1基因过表达细胞株 |
人原代肾间质成纤维细胞专用培养基 | CEP68基因过表达细胞株 |
人原代乳腺癌相关成纤维细胞专用培养基 | SYCP2L基因过表达细胞株 |
兔肠平滑肌细胞SNU-398细胞专用培养基 | NCKIPSD基因过表达细胞株 |
兔原代脐带血间充质干细胞专用培养基 | AUNIP基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（EDTA、胰蛋白酶）、Ⅳ型胶原酶、DMEM + 10% FBS + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出肠组织。
2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入EDTA+胰蛋白酶混合消化液，37℃消化32min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-220000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察梭形或纺锤形，贴壁生长，呈峰窝状排列及生长状态。
