产品名称 | 兔破骨细胞 | 组织来源 | 骨组织 |
英文名称 | Rabbit Osteoclasts | 种属 | 兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3637 |
方法简介 实验室分离的兔破骨细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔破骨细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔破骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 多核巨细胞
传代比例： -
传代特性： 不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔破骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：2.5-3.5月龄白色家兔，体重2.2-2.8kg，每只可分离1.8-3.2×10⁶个目标细胞，活力>89%
试剂：弹性蛋白酶、胰蛋白酶、EDTA、无钙镁PBS、RPMI-1640培养基
分离纯化步骤
取材组织经D-Hanks液冲洗后，手工剔除杂质，剪成1-2mm³小块，加入弹性蛋白酶、胰蛋白酶、EDTA、无钙镁PBS37℃消化120-180分钟
消化液经70目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、500g离心12分钟收集细胞沉淀
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
调整细胞密度至2×10⁴接种于预处理培养皿，37℃、5% CO₂培养箱培养
细胞贴壁后呈典型形态，生长速率适中，每3-5天传代一次，传代后活力保持良好
常见问题优化
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
大鼠OAYP1B1(OAYP1B1)elisa试剂盒 | hne2人鼻咽癌 |
大鼠甲状腺转运体 (OATP1C1)elisa试剂盒 | 兔颈动脉平滑肌细胞 |
大鼠有机阴离子转运多肽(OATP1B2)elisa试剂盒 | 小鼠牙髓干细胞 |
大鼠有机阴离子转运蛋白3(OAT-3)elisa试剂盒 | 小鼠小胶质细胞 |
大鼠钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶(CAM KK)elisa试剂盒 | 小鼠淋巴管内皮细胞 |
大鼠钙调神经磷酸酶(CaN)elisa试剂盒 | 兔输尿管平滑肌细胞 |
猪D二聚体（D2D）elisa试剂盒 | 小鼠视网膜微周细胞 |
SU-DHL-2人B淋巴瘤 细胞专用培养基 | ZKSCAN7基因过表达细胞株 |
SCC-9人类鳞状上皮舌癌细胞专用培养基 | SLC26A4基因过表达细胞株 |
狗原代脐静脉内皮细胞专用培养基 | GPR85基因过表达细胞株 |
小鼠原代肺间充质干细胞专用培养基 | ZFYVE1基因过表达细胞株 |
人原代乳腺上皮细胞专用培养基 | ADD2基因过表达细胞株 |
兔破骨细胞SNU-216细胞专用培养基 | APOBEC4基因过表达细胞株 |
小鼠原代主动脉内皮细胞专用培养基 | CYP7A1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷D-Hanks液、消化液（RICAM、淋巴细胞分离液、NH4Cl）、RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME、双抗。
3. 健康新西兰大白兔（2.0-2.5kg），3%戊巴比妥钠耳缘静脉注射，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 空气栓塞法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取骨髓。
2. 置于冰预冷D-Hanks液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的骨髓组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与RICAM+淋巴细胞分离液+NH4Cl混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化44min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经200μm滤网过滤，采用Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞，去除未消化组织块。
2. 用RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME调整细胞浓度至140000.0cells/mL，接种于预涂未涂层的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2天更换新鲜培养基，倒置显微镜下观察细胞贴壁及悬浮或半贴壁生长，圆形或椭圆形，折光性强。
