产品名称 | 小鼠髂动脉内皮细胞 | 组织来源 | 髂动脉组织 |
英文名称 | Mouse Iliac Artery Endothelial Cells | 种属 | 小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3595 |
方法简介 实验室分离的小鼠髂动脉内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠髂动脉内皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠髂动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠髂动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：5-7周龄ICR小鼠，体重18-24g，每只取材获0.35-0.75×10⁶个细胞，活力>86%
试剂：中性蛋白酶、胶原酶D、DNA酶I、Ca²⁺/Mg²⁺-free PBS、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
组织取材后迅速放入预冷PBS中转运，无菌操作下剔除周围组织，剪碎后加入中性蛋白酶、胶原酶D、DNA酶I、Ca²⁺/Mg²⁺-free PBS于37℃消化30-60分钟
细胞悬液依次过100目、200目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
内皮细胞生长需要较高的血清浓度和血管内皮生长因子支持，注意维持培养基新鲜度
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
大鼠视神经萎缩症蛋白1(OPA1)elisa试剂盒 | WILL-2人B细胞 |
大鼠网膜素1(Omentin-1)elisa试剂盒 | 大鼠脉络膜成纤维细胞 |
大鼠骨调蛋白(OMD)elisa试剂盒 | 大鼠内皮祖细胞 |
大鼠成骨生长肽(OGP)elisa试剂盒 | 大鼠表皮干细胞 |
大鼠父系表达基因2(PEG2)elisa试剂盒 | 大鼠子宫内膜干细胞 |
大鼠复制蛋白A(RPA-70)elisa试剂盒 | 小鼠股动脉平滑肌细胞 |
猪Parkin蛋白（PP）elisa试剂盒 | 大鼠脑微内皮细胞 |
SK-NO-1人急性髓系白血病细胞专用培养基 | GALNT18基因过表达细胞株 |
REH人急性非B非T淋巴白血病细胞专用培养基 | PTPN22基因过表达细胞株 |
羊原代子宫内膜上皮细胞专用培养基 | ZER1基因过表达细胞株 |
人原代脑微血管平滑肌细胞专用培养基 | SKI基因过表达细胞株 |
人原代食管上皮细胞专用培养基 | CYP7A1基因过表达细胞株 |
小鼠髂动脉内皮细胞SK-MEL-2+luc细胞专用培养基 | ACTL7B基因过表达细胞株 |
人原代子宫内膜基质细胞专用培养基 | BTBD18基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷PBS液、消化液（Ⅳ型胶原酶、弹性蛋白酶）、透明质酸酶、DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。
3. SPF级C57BL/6小鼠（18-22g），戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. CO2吸入法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出心脏组织。
2. 浸入冰预冷PBS液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入Ⅳ型胶原酶+弹性蛋白酶混合消化液，37℃消化43min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用Percoll密度梯度离心纯化内皮细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-230000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察鹅卵石样铺路石状排列，贴壁生长，细胞边界清晰及生长状态。
