产品名称 | 小鼠卵泡颗粒细胞 | 组织来源 | 卵巢组织 |
英文名称 | Mouse Granulosa Cells | 种属 | 小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3587 |
方法简介 实验室分离的小鼠卵泡颗粒细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠卵泡颗粒细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠卵泡颗粒细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠卵泡颗粒细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：6-8周龄BALB/c小鼠，体重20-25g，单只取材获0.4-0.9×10⁶个细胞，活率>88%
试剂：Dispase、Ⅳ型胶原酶、胰蛋白酶、Hanks液、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
组织块经Hanks液反复冲洗后剪碎，加入Dispase、Ⅳ型胶原酶、胰蛋白酶、Hanks液于37℃水浴消化30-60分钟，期间间歇振荡
细胞悬液依次过100目、200目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
采用预混合抗体标记+磁珠分选策略，特异性富集目标细胞，纯度>88%
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
细胞贴壁后呈典型形态，生长速率适中，每3-5天传代一次，传代后活力保持良好
常见问题优化
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠Osterix蛋白(OSX)elisa试剂盒 | SU-DHL-8人B细胞 |
大鼠跨膜蛋白Orai2(Orai2)elisa试剂盒 | 大鼠乳腺导管上皮细胞 |
大鼠阿啡肽(OPI)elisa试剂盒 | 大鼠肾间质成纤维细胞 |
大鼠过氧亚硝基阴离子(ONOO-)elisa试剂盒 | 大鼠肝实质细胞 |
大鼠粪臭素(skatole)elisa试剂盒 | 小鼠胸主动脉平滑肌细胞 |
大鼠封闭蛋白1(Claudin-1)elisa试剂盒 | 大鼠脑动脉内皮细胞 |
猪S100β蛋白（S100β）elisa试剂盒 | 大鼠垂体细胞 |
SK-N-BE(2)人神经母瘤细胞专用培养基 | DTX3L基因过表达细胞株 |
RAMOS RA1人B淋巴瘤细胞专用培养基 | EPS8L3基因过表达细胞株 |
小鼠原代脑动脉血管内皮细胞专用培养基 | CDC5L基因过表达细胞株 |
人原代宫颈癌相关成纤维细胞专用培养基 | DHRS13基因过表达细胞株 |
人原代输卵管成纤维细胞专用培养基 | TMEM260基因过表达细胞株 |
小鼠卵泡颗粒细胞SK-CO-1细胞专用培养基 | GABPB2基因过表达细胞株 |
兔原代视网膜前体细胞专用培养基 | BCL6B基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷PBS液、胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液、K-SFM培养基 + EGF + BSA、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. SPF级C57BL/6小鼠（18-22g），戊巴比妥钠腹腔注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. CO2吸入法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取卵巢组织，冰预冷PBS液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅳ消化液，37℃水浴消化39min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用K-SFM培养基 + EGF + BSA重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2天换液一次，定期倒置显微镜观察多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接及生长情况。
