小鼠脊髓神经少突胶质细胞

小鼠脊髓神经少突胶质细胞

取材自KM小鼠的脊髓神经组织，经Ⅰ型胶原酶+DNase联合消化获取原代少突胶质细胞，接种于胶原预包被培养皿中，采用含FGF/bFGF的专用培养基培养；通过凋亡检测(Annexin V/PI)鉴定GFAP表达特征，免疫沉淀(IP)检测AQP4表达水平，并采用慢病毒转染评估细胞功能状态。

产品名称：小鼠脊髓神经少突胶质细胞

英文名称： Mouse Spinal Cord Oligodendrocytes

组织来源： 脑组织

默认种属 ：小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠脊髓神经少突胶质细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠脊髓神经少突胶质细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠脊髓神经少突胶质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 多突触

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠脊髓神经少突胶质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。

2. 配制冰预冷PBS液、Ⅳ型胶原酶+胰蛋白酶混合消化液、Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。

3. SPF级C57BL/6小鼠（18-22g），戊巴比妥钠腹腔注射麻醉处理。

二、取材与预处理

1. CO2吸入法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。

2. 无菌条件下摘取脑组织，冰预冷PBS液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。

3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。

三、细胞分离与消化

1. 剪碎组织加入Ⅳ型胶原酶消化液，37℃水浴消化39min，期间每隔5-10min振荡吹打。

2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。

3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。

2. 用Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。

3. 37℃、5% CO2培养，每3天换液一次，定期倒置显微镜观察多突起状，贴壁生长，可见神经突延伸及生长情况。

取材时必须在冰上低温操作，30分钟内完成脊髓组织的分离与纯化处理，室温暴露时间过长会直接导致细胞活性下降40%以上。

培养器皿提前用0.1mg/ml纤连蛋白包被过夜，4°C保存，使用前用PBS洗涤2次，该处理可显著促进脊髓神经少突胶质的贴壁生长。

该细胞为贴壁生长型，体外可传代10-15次，建议每2天换液一次，传代比例控制在1:2以内以维持细胞正常形态和功能。

培养基中需添加DMEM/F12含10% FBS、1% P/S和10ng/ml PDGF，其中血清浓度应根据细胞生长状态适当调整，低血清条件有助于减少杂细胞污染但可能影响脊髓神经少突胶质增殖速度。

换液操作全程注意无菌操作，使用经0.22μm滤膜过滤的新鲜培养基，加入后轻摇培养皿使培养基均匀分布，避免产生气泡影响细胞生长。