产品名称 | 小鼠脊髓神经干细胞 | 组织来源 | 脊髓组织 |
英文名称 | Mouse Spinal Cord Neural Stem Cells | 种属 | 小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3530 |
方法简介 实验室分离的小鼠脊髓神经干细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠脊髓神经干细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠脊髓神经干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 圆形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠脊髓神经干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：6-8周龄BALB/c小鼠，体重20-25g，单只取材获0.4-0.9×10⁶个细胞，活率>88%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA、DMEM/F12完全培养基
分离纯化步骤
取材组织经PBS清洗去除血液和杂质，剪碎至1mm³大小，加入0.125%胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、DNase I、BSA于37℃振荡消化15-30分钟
滤过70目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，300g离心8分钟
利用免疫磁珠分选技术（MACS）纯化目标细胞，纯度可达85%以上
原代培养要点
调整细胞浓度至2×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
原代干细胞贴壁效率较低，建议适当提高接种密度以保证存活率
常见问题优化
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)elisa试剂盒 | UM-UC-3膀胱癌 |
大鼠ⅡA型前胶原N端前肽(PⅡANP)elisa试剂盒 | 人子宫颈表皮细胞ME-180(STR鉴定正确) |
大鼠核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(p70s6k)elisa试剂盒 | 小鼠垂体细胞GT1-1（种属鉴定） |
大鼠P53蛋白(P53)elisa试剂盒 | 人乳腺导管细胞BT-549(STR鉴定正确) |
大鼠二酰基甘油酰基转移酶1(DGAT1)elisa试剂盒 | 人纤维肉细胞HT-1080(STR鉴定正确) |
大鼠发状分裂相关增强子-1(Hes1)elisa试剂盒 | 人平滑肌细胞 |
猪β氨基己糖苷酶（β-Hex）elisa试剂盒 | 小鼠细胞株转染MC-38+OVA（种属鉴定） |
NCI-H446人小肺癌细胞专用培养基 | FLRT2基因过表达细胞株 |
MHCC-97H人高转移性肝癌细胞专用培养基 | CCDC93基因过表达细胞株 |
小鼠原代支气管平滑肌细胞专用培养基 | CHST5基因过表达细胞株 |
人原代冠状动脉平滑肌细胞专用培养基 | BCL6B基因过表达细胞株 |
人原代小梁网细胞专用培养基 | DND1基因过表达细胞株 |
小鼠脊髓神经干细胞RSC96细胞专用培养基 | FAM185A基因过表达细胞株 |
兔原代股动脉内皮细胞专用培养基 | ANGPTL2基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷PBS液、消化液（Ⅳ型胶原酶+胰蛋白酶）+DNA酶Ⅰ、Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX、双抗。
3. SPF级C57BL/6小鼠（18-22g），戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. CO2吸入法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取脑。
2. 置于冰预冷PBS液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的脑组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与Ⅳ型胶原酶+胰蛋白酶+DNA酶Ⅰ混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化38min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。
2. 用Neurobasal Medium + B27 + 1% 双抗 + 2mM GlutaMAX调整细胞浓度至130000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及多突起状，贴壁生长，可见神经突延伸。
