小鼠子宫内膜基质细胞

小鼠子宫内膜基质细胞

取材自KM小鼠的子宫内膜组织，经胰蛋白酶+EDTA联合消化获取原代基质细胞，接种于胶原预包被培养皿中，采用Ham's F12培养基培养；通过co-IP鉴定CD90表达特征，共聚焦显微镜观察检测CD73表达水平，并采用流式细胞术评估细胞功能状态。

产品名称：小鼠子宫内膜基质细胞

英文名称： Mouse Endometrial Stromal Cells

组织来源： 子宫组织

默认种属 ：小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠子宫内膜基质细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠子宫内膜基质细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠子宫内膜基质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:3

传代特性： 可传5-8代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠子宫内膜基质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。

2. 配制冰预冷PBS液、Ⅳ型胶原酶+胶原酶Ⅰ混合消化液、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。

3. SPF级C57BL/6小鼠（18-22g），戊巴比妥钠腹腔注射麻醉处理。

二、取材与预处理

1. CO2吸入法处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。

2. 无菌条件下摘取子宫组织，冰预冷PBS液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。

3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。

三、细胞分离与消化

1. 剪碎组织加入Ⅳ型胶原酶消化液，37℃水浴消化30min，期间每隔5-10min振荡吹打。

2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。

3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。

2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。

3. 37℃、5% CO2培养，每2-3天换液一次，定期倒置显微镜观察长梭形或纺锤形，贴壁生长，呈旋涡状排列及生长情况。

取材前动物需禁食12小时，CO2窒息法处死后立即取子宫内膜组织，置于预冷的PBS中运输至实验室，从取材到开始消化处理不超过20分钟。

培养器皿必须提前用0.1mg/ml胶原酶I包被过夜，未包被的培养板子宫内膜基质贴壁效率极低，影响后续实验结果。

该细胞贴壁生长，每2-3天换液一次，传代比例为1:2至1:3，过度传代(>P5)会导致细胞衰老和功能性下降。

培养过程中需持续添加α-MEM含10% FBS和1% P/S以维持细胞最佳生长状态，抗生素浓度不宜过高以免影响细胞代谢活性，建议常规使用1% P/S即可。

换液操作全程注意无菌操作，使用经0.22μm滤膜过滤的新鲜培养基，加入后轻摇培养皿使培养基均匀分布，避免产生气泡影响细胞生长。