产品名称 | 小鼠胰腺上皮细胞 | 组织来源 | 胰腺组织 |
英文名称 | Mouse Pancreatic Epithelial Cells | 种属 | 小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2770 |
方法简介 实验室分离的小鼠胰腺上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠胰腺上皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠胰腺上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠胰腺上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：5-7周龄ICR小鼠，体重18-24g，每只取材获0.35-0.75×10⁶个细胞，活力>86%
试剂：中性蛋白酶、胶原酶D、DNA酶I、Ca²⁺/Mg²⁺-free PBS、IMDM培养基
分离纯化步骤
取材组织经PBS清洗去除血液和杂质，剪碎至1mm³大小，加入中性蛋白酶、胶原酶D、DNA酶I、Ca²⁺/Mg²⁺-free PBS于37℃振荡消化30-60分钟
细胞悬液依次过100目、200目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
上皮细胞贴壁生长，呈多角形铺路石样排列，接种后48-72小时可见细胞集落形成
常见问题优化
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
大鼠抗血小板IgM抗体(PA-IgM)elisa试剂盒 | TM-31脑部多形性成釉细胞瘤 |
大鼠苯乙酰谷氨酰胺(PAG)elisa试剂盒 | 大鼠肝上皮样干细胞WB-F344（种属鉴定） |
大鼠血小板活化因子(PAF)elisa试剂盒 | 人正常乳腺细胞Hs578bst(STR鉴定正确) |
大鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)elisa试剂盒 | 人皮肤成纤维细胞BJ(STR鉴定正确) |
大鼠恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)elisa试剂盒 | 人乳腺浸润性导管旁皮肤细胞CCD-1095Sk(STR鉴定正确) |
大鼠儿茶酚雌激素(CE)elisa试剂盒 | 人非小细胞肺细胞NCI-H2347(STR鉴定正确) |
猪β甘露糖苷酶（β Manase）elisa试剂盒 | 人正常上皮细胞RWPE-1(STR鉴定正确) |
NCI-H2452人间皮瘤细胞专用培养基 | MTMR11基因过表达细胞株 |
ME-180人子宫颈表皮癌细胞专用培养基 | ACTL7B基因过表达细胞株 |
大鼠原代大隐静脉平滑肌细胞专用培养基 | CYP1A2基因过表达细胞株 |
兔原代口腔黏膜成纤维细胞专用培养基 | DND1基因过表达细胞株 |
人原代牙髓干细胞专用培养基 | APOL6基因过表达细胞株 |
小鼠胰腺上皮细胞RL95-2细胞专用培养基 | CHRNA4基因过表达细胞株 |
兔原代骨细胞专用培养基 | ACSM6基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷PBS液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶）、胰蛋白酶、K-SFM培养基 + EGF + BSA（37℃预热）、双抗溶液。
3. SPF级C57BL/6小鼠（18-22g），戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. CO2吸入法处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出上皮细胞组织。
2. 浸入冰预冷PBS液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液，37℃消化33min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用K-SFM培养基 + EGF + BSA重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-230000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2天换液一次，镜检观察多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接及生长状态。
