产品名称 | 小鼠表皮成纤维细胞 | 组织来源 | 皮肤组织 |
英文名称 | Mouse Epidermal Fibroblasts | 种属 | 小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3190 |
方法简介 实验室分离的小鼠表皮成纤维细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠表皮成纤维细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠表皮成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠表皮成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：8周龄SPF级C57BL/6J小鼠，体重20-28g，每只可得0.5-1.0×10⁶个目标细胞，活力>90%
试剂：Dispase、Ⅳ型胶原酶、胰蛋白酶、Hanks液、α-MEM培养基
分离纯化步骤
组织块经Hanks液反复冲洗后剪碎，加入Dispase、Ⅳ型胶原酶、胰蛋白酶、Hanks液于37℃水浴消化60-90分钟，期间间歇振荡
消化液经100目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、400g离心10分钟收集细胞沉淀
细胞沉淀重悬于含10% FBS的培养基中，经Ficoll密度梯度离心（400g，10分钟）纯化目标细胞
原代培养要点
调整细胞密度至3×10⁴接种于预处理培养皿，37℃、5% CO₂培养箱培养
细胞贴壁生长较快，呈梭形，接种后24-48小时可见明显贴壁，第3-5天可达80-90%融合
常见问题优化
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
大鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)elisa试剂盒 | SNU-1105脑部多形性成釉细胞瘤 |
大鼠胰淀粉酶(PAMY)elisa试剂盒 | 人胃细胞SGC-7901(STR鉴定正确) |
大鼠L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)elisa试剂盒 | 男性正常龟头细胞系HS68 |
大鼠纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)elisa试剂盒 | 大鼠肝Kupffer细胞 |
大鼠多效生长因子(PTN)elisa试剂盒 | 小鼠肺细胞LLC（种属鉴定） |
大鼠多药耐药关联蛋白(MRP)elisa试剂盒 | 大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1（种属鉴定） |
猪β内酰胺酶（LACTβ）elisa试剂盒 | 人眼脉络黑色细胞OCM1(STR鉴定正确) |
NCI-H2228人肺癌细胞专用培养基 | PLA2G6基因过表达细胞株 |
MDA-MB-453人乳腺癌细胞专用培养基 | EXOC6B基因过表达细胞株 |
鸡原代骨骼肌细胞专用培养基 | BCL6B基因过表达细胞株 |
大鼠原代输卵管平滑肌细胞专用培养基 | EXD2基因过表达细胞株 |
人原代牙周膜成纤维细胞专用培养基 | MCMDC2基因过表达细胞株 |
小鼠表皮成纤维细胞RGC-5细胞专用培养基 | GCKR基因过表达细胞株 |
小鼠原代口腔黏膜成纤维细胞专用培养基 | GHR基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷PBS液、消化液（Ⅰ型胶原酶+Dispase II）+胰蛋白酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、双抗。
3. SPF级C57BL/6小鼠（18-22g），戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. CO2吸入法处死，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取皮肤。
2. 置于冰预冷PBS液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的皮肤组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与Ⅰ型胶原酶+Dispase II+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化38min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，1次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用差速贴壁法去除杂质细胞，去除未消化组织块。
2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗调整细胞浓度至130000.0cells/mL，接种于预涂胶原的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2-3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及长梭形或纺锤形，贴壁生长，细胞核大而圆，核仁明显。
