大鼠脾脏单核细胞

大鼠脾脏单核细胞

以Sprague-Dawley大鼠脾脏单核细胞组织为材料，采用免疫磁珠分选(MACS)分离细胞，经胰蛋白酶-EDTA消化后传代，使用F-12培养基维持细胞生长；运用co-IP检测CD133的细胞表面/胞内表达，通过CCK-8增殖实验分析蛋白表达谱，并结合转录组学分析探究相关信号通路。 传代培养6代后细胞仍保持良好增殖能力。

产品名称：大鼠脾脏单核细胞

英文名称： Rat Splenic Monocytes

组织来源： 脾脏组织

默认种属 ：大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠脾脏单核细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠脾脏单核细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠脾脏单核细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 悬浮

细胞形态： 圆形

传代比例： -

传代特性： 不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠脾脏单核细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。

2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶）、胰蛋白酶、RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME（37℃预热）、双抗溶液。

3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。

二、取材与预处理

1. 颈椎脱臼处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出目标组织。

2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。

3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块加入胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液，37℃消化36min，间断吹打。

2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。

3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液过200μm细胞滤网，采用Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞，去除团块和未消化组织。

2. 沉淀细胞用RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-210000.0cells/cm²密度接种。

3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2天更换新鲜培养基，镜检观察悬浮或半贴壁生长，圆形或椭圆形，折光性强及生长状态。

SD大鼠或Wistar大鼠经10%水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射后，无菌操作下取出相应组织，迅速去除周围脂肪组织和结缔组织，用预冷HBSS洗涤3次备用。

培养板需提前用0.01%多聚赖氨酸包被2小时，使用前PBS洗涤3次，未处理的培养表面会导致脾脏单核贴壁不良和形态异常。

该细胞为贴壁型细胞，体外培养条件下可稳定增殖，建议每2-3天换液，传代比例1:3，培养温度严格控制在37°C。

培养基中需添加RPMI-1640含10% FBS和1% P/S，其中血清浓度应根据细胞生长状态适当调整，低血清条件有助于减少杂细胞污染但可能影响脾脏单核增殖速度。

培养过程中定期观察培养基pH变化(颜色由红变黄提示需换液)，换液频率根据细胞密度调整，高密度时每日换液一次，低密度时每2-3天换液。