大鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)

大鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)

从SD大鼠的(未成熟DC细胞)组织中分离纯化骨髓树突状细胞，采用密度梯度离心法获得高纯度细胞群体，在MEM基础培养基下扩增培养；运用钙成像检测HLA-DR, CD11c标志物表达，通过蛋白质组学(质谱)分析蛋白表达谱，并结合钙流检测综合评价细胞表型特征。 传代培养7代后细胞仍保持良好增殖能力。

产品名称：大鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)

英文名称： Rat Bone Marrow-derived Immature Dendritic Cells (BMDCs)

组织来源： 骨髓组织

默认种属 ：大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 未分化

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。

2. 配制冰预冷D-Hanks液、RICAM+淋巴细胞分离液混合消化液、RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。

3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉处理。

二、取材与预处理

1. 颈椎脱臼处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。

2. 无菌条件下摘取骨髓组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。

3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。

三、细胞分离与消化

1. 剪碎组织加入RICAM消化液，37℃水浴消化30min，期间每隔5-10min振荡吹打。

2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。

3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液经200μm滤膜过滤，采用Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞，去除大颗粒杂质。

2. 用RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至未涂层预包被的培养器皿。

3. 37℃、5% CO2培养，每2天更换新鲜培养基，定期倒置显微镜观察悬浮或半贴壁生长，圆形或椭圆形，折光性强及生长情况。

取材时必须在冰上低温操作，30分钟内完成骨组织的分离与纯化处理，室温暴露时间过长会直接导致细胞活性下降40%以上。

培养皿需用胶原蛋白-I型(5μg/cm2)包被过夜，次日PBS洗涤3次后使用，未包被表面骨髓树突状(未成熟DC)难以正常贴附和铺展。

该细胞为贴壁型细胞，体外培养条件下可稳定增殖，建议每2-3天换液，传代比例1:3，培养温度严格控制在37°C。

培养体系中需添加RPMI-1640含10% FBS、20ng/ml IL-4和20ng/ml GM-CSF，血清应选用优质胎牛血清(FBS)，批次间差异可能显著影响细胞生长，建议同一实验使用同一批次血清。

日常维护中需每日检查细胞形态和培养基颜色，出现浑浊或颜色异常应立即换液并排查污染，传代后24小时内避免换液以利于细胞贴附恢复。