产品名称 | 大鼠精原细胞 | 组织来源 | 睾丸组织 |
英文名称 | Rat Spermatogonial Cells | 种属 | 大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3528 |
方法简介 实验室分离的大鼠精原细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠精原细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠精原细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 圆形
传代比例： -
传代特性： 不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠精原细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：8-10周龄SPF级Wistar大鼠，体重200-250g，每只可获取1.0-1.8×10⁶个细胞，活力>90%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、DNase I、透明质酸酶、RPMI-1640培养基
分离纯化步骤
取材组织经PBS清洗去除血液和杂质，剪碎至1mm³大小，加入0.125%胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、DNase I、透明质酸酶于37℃振荡消化30-60分钟
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
原代细胞贴壁生长，形态典型，接种后48小时开始增殖，第5-7天可达到亚融合状态
常见问题优化
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
大鼠磷酸二酯酶2(PDE2)elisa试剂盒 | HS68 (STR)男性正常龟头细胞 |
大鼠磷酸化Disabled同源物1(p-DAB1)elisa试剂盒 | 人非小细胞肺细胞HCC-44(STR鉴定正确) |
大鼠保护素D1(PD1 )elisa试剂盒 | 鸭子胚胎成纤维细胞 Duckembryo（种属鉴定） |
大鼠降钙素原(PCT)elisa试剂盒 | 人口腔鳞耐药株SCC25+DDP(STR鉴定正确) |
大鼠丁酰辅酶A(BCA)elisa试剂盒 | 人肺细胞CAL-12T(STR鉴定正确) |
大鼠豆荚蛋白(LGMN)elisa试剂盒 | 鸡淋巴细胞DT40（种属鉴定） |
猪白细胞介素16（IL-16）elisa试剂盒 | 人肾透明细胞细胞带荧光酶Caki-2+LUC (STR鉴定正确) |
B95-8EBV 转化的绒猴白细胞专用培养基 | GPR19基因过表达细胞株 |
MDA-MB-157人乳腺癌细胞专用培养基 | GPR148基因过表达细胞株 |
人原代神经干细胞专用培养基 | FIZ1基因过表达细胞株 |
人原代椎间盘纤维环细胞专用培养基 | CHRNA4基因过表达细胞株 |
人原代真皮微血管内皮细胞专用培养基 | ZNF808基因过表达细胞株 |
大鼠精原细胞PtK1[NBL-3]细胞专用培养基 | CSRNP3基因过表达细胞株 |
兔原代肠神经胶质细胞专用培养基 | PRKCE基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷D-Hanks液、胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 颈椎脱臼处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取睾丸组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅳ消化液，37℃水浴消化33min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2-3天换液一次，定期倒置显微镜观察圆形或椭圆形，贴壁生长，细胞核大，核仁明显及生长情况。
