产品名称 | 大鼠眼动脉内皮细胞 | 组织来源 | 眼组织 |
英文名称 | Rat Ophthalmic Artery Endothelial Cells | 种属 | 大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3516 |
方法简介 实验室分离的大鼠眼动脉内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠眼动脉内皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠眼动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠眼动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：4-6周龄清洁级SD大鼠，体重180-220g，每只可获得0.8-1.5×10⁶个细胞，活力>88%
试剂：中性蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、DNA酶、MEM培养基
分离纯化步骤
取材组织经PBS清洗去除血液和杂质，剪碎至1mm³大小，加入中性蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、DNA酶于37℃振荡消化30-60分钟
细胞悬液依次过100目、200目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
利用免疫磁珠分选技术（MACS）纯化目标细胞，纯度可达90%以上
原代培养要点
调整细胞密度至3×10⁴接种于预处理培养皿，37℃、5% CO₂培养箱培养
内皮细胞生长需要较高的血清浓度和血管内皮生长因子支持，注意维持培养基新鲜度
常见问题优化
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
大鼠蛋白二硫键异构酶(PDI)elisa试剂盒 | SNU-251卵巢癌 |
大鼠丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)elisa试剂盒 | 人类原巨核细胞型白血细胞UT-7(STR鉴定正确) |
大鼠血小板衍生生长因子(PDGFs)elisa试剂盒 | 人肺腺细胞NCI-H1975(STR鉴定正确) |
大鼠血小板衍生生长因子C(PDGFC)elisa试剂盒 | 人肺腺细胞HCC1833 (STR鉴定正确) |
大鼠低氧诱导因子1β(HIF1β)elisa试剂盒 | 大鼠软骨细胞 |
大鼠低氧诱导因子2β(HIF-2β)elisa试剂盒 | 人肺鳞细胞SK-MES-1(STR鉴定正确) |
猪白细胞介素2受体α（IL-2Rα）elisa试剂盒 | 人肺腺细胞LTEP-α-2(STR鉴定正确) |
V79仓鼠肺细胞专用培养基 | FGD3基因过表达细胞株 |
LX-2+GFP人肝星形+GFP细胞专用培养基 | GPR65基因过表达细胞株 |
兔原代心肌成纤维细胞专用培养基 | WDR27基因过表达细胞株 |
大鼠原代DC细胞专用培养基 | FANCF基因过表达细胞株 |
人原代主动脉瓣膜内皮细胞专用培养基 | CD19基因过表达细胞株 |
大鼠眼动脉内皮细胞PC-9细胞专用培养基 | GPR180基因过表达细胞株 |
大鼠原代大隐静脉平滑肌细胞专用培养基 | CASS4基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（Ⅳ型胶原酶、弹性蛋白酶）、透明质酸酶、DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。
3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 颈椎脱臼处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出心脏组织。
2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入Ⅳ型胶原酶+弹性蛋白酶混合消化液，37℃消化41min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用Percoll密度梯度离心纯化内皮细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-210000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察鹅卵石样铺路石状排列，贴壁生长，细胞边界清晰及生长状态。
